Caracterização funcional de variantes no gene APOB em portadores de Hipercolesterolemia Familial

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Malaquias, Vanessa Barbosa
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: APOB; Captação de LDL; Diagnóstico molecular; Estudo funcional; Familial hypercholesterolemia; Functional study; Hipercolesterolemia familial; LDL uptake; Molecular diagnosis
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-22052025-104410/

A Hipercolesterolemia Familial (HF) é uma doença hereditária autossômica codominante, que predispõe precocemente à aterosclerose, principal fator etiopatogênico subjacente à ocorrência de doenças cardiovasculares. Fenotipicamente caracterizada por elevação do colesterol total (CT &#8805; 310 mg/dL) e da lipoproteína de baixa densidade (LDL-C &#8805; 190 mg/dL), além de manifestações clínicas como xantomas tendíneo, xantelasmas e arco córneo. O diagnóstico molecular é confirmado pela presença das variantes patogênicas nos genes LDLR, APOB, PCSK9 e LDLRAP1. Apesar de numerosas variantes descritas no gene da Apoliprotéina B, poucas tiveram sua patogenicidade validada experimentalmente, impactando na precisão diagnóstica e terapêutica. Neste estudo, avaliaram-se variantes do gene APOB identificadas pela análise do sequenciamento direcionado ao exon (ETGS), em uma coorte brasileira com fenótipo hipercolesterolêmico (n = 372), por meio de predições in silico de patogenicidade e ensaios funcionais in vitro de captação de LDL em células HepG2 e HUVEC. Foram identificadas 121 variantes no gene APOB. Após curadoria manual e aplicação dos critérios ACMG/AMP, 24 variantes foram priorizadas para estudos funcionais, das quais 13 (54,2%) foram classificadas como patogênicas, 7 (29,2%) como provavelmente patogênicas e 4 (16,7%) com significado incerto (VUS). Estudos funcionais in vitro em células HepG2 e HUVEC demonstraram que variantes patogênicas (p.Thr194Met, p.Pro994Leu, p.Asn1914Ser, p.Ala4515*) localizadas em domínios críticos da Apo B-100 (&#946;-barrel, &#946;-belt) reduziram significativamente a captação da LDL(até 91% em HepG2, p < 0,0001), comprometendo a ligação ao receptor LDLr e a internalização celular. Alterações estruturais nessas variantes impactaram a estabilidade conformacional da proteína, a interação com lipídios e a formação de partículas LDL, resultando em acúmulo plasmático de LDL-C (média de 243 mg/dL vs. controles, p = 0,033) e maior prevalência de eventos cardiovasculares (IAM, DAC e revascularização miocárdica em 35% dos portadores). Este estudo oferece contribuições significativas para o diagnóstico genético da HF-2, possibilitando uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares subjacentes e auxiliando na identificação precoce de indivíduos em risco elevado.