Estudos espectroscópicos das interações da hemoglobina extracelular de Glossoscolex paulistus e albuminas humana (HSA) e bovina (BSA) com surfactantes iônicos

• Ano de defesa: 2003
• Autor(a) principal: Gelamo, Emerson Luiz
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: albumina bovina; albumina humana; bovine serum albumin; espectroscopia; extracellular hemoglobin; hemoglobina extracelular; human serum albumin; ionic surfactants; spectroscopy; surfactantes iônicos
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75132/tde-14082025-075839/

Neste trabalho são apresentados os resultados obtidos através das técnicas espectroscópicas de fluorescência estática e resolvida no tempo, e dicroísmo circular, assim como da técnica estrutural de espalhamento de raio X a baixo ângulo (SAXS), no estudo das interações dos surfactantes aniônico, dodecil sulfato de sódio (SDS), zwiteriônico, N-hexadecil-N,N-dimetil-3-amônio-1-propano sulfonato (HPS), e catiônico, cloreto de cetiltrimetilamônio (CTAC), com albuminas humana (HSA) e bovina (BSA) nos pHs 5,0, 7,0 e 9,0. Os resultados de fluorescência mostraram que nas interações da BSA com os surfactantes, às concentrações iniciais, ocorre uma supressão da fluorescência nos três pHs estudados. Na interação dos surfactantes com HSA um efeito contrário é verificado, ou seja, ocorre um aumento do rendimento quântico, com a ocorrência de cooperatividade na ligação dos surfactantes. Medidas de tempo de vida de fluorescência apresentam um decaimento biexponencial com tempos de vida médios para a BSA de 6,3 ns, e para a HSA de 4,9 ns, que são reduzidos com o aumento da concentração de SDS e CTAC. Os resultados de dicroísmo circular indicam que não ocorrem mudanças substanciais na estrutura secundária das albuminas na faixa de concentração de surfactante utilizada, e a modelagem molecular revela que as mudanças espectroscópicas verificadas estão relacionadas com as mudanças na orientação dos resíduos triptofanos W131 e W214 na BSA, e do W214 na HSA, assim como mudanças na orientação e posição de resíduos vizinhos. Às concentrações mais elevadas, as curvas de espalhamento de raio X apresentam um pico largo na região de Porod, indicando a presença de micelas de surfactantes em solução. Os parâmetros característicos das micelas ligadas às proteínas são similares aos obtidos para as micelas puras. A hemoglobina extracelular de Glossoscolex paulistus (HbGp), similar à da Lumbricus terrestris (HbLt), é uma proteína oligomérica formada por dois discos hexagonais sobrepostos, e é constituída por grande quantidade de subunidades de pesos moleculares de 12 a 16 kDa, que conferem à proteína um peso molecular total de 3 MDa. Na ausência de surfactante, as curvas de SAXS no pH 7,0 são muito parecidas e revelam que a hemoglobina nas formas oxi-, meta- e cianometa- apresentam raios de giro similares em torno de 130 Å, com diâmetro máximo de 300 Å. Estes valores são idênticos aos valores publicados recentemente para a HbLt. Na presença de 2 mM SDS no pH 7,0, a oxi-HbGp possui uma curva de espalhamento de uma partícula de raio de giro de 130 Å, sugerindo que ocorre uma dissociação inicial dos dois discos hexagonais. No caso da meta-HbGp nestas condições, a dissociação é mais efetiva. No pH 9,0, tanto a oxi- quanto a meta-HbGp sofrem uma dissociação total, com ou sem surfactante, sendo que a partícula em solução possui raio de giro de 30 Å. No caso da cianometa-HbGp, não ocorre dissociação no pH 7,0 na presença de surfactante, nem no pH 9,0, sugerindo que nesta forma, a proteína oligomérica apresenta a maior estabilidade estrutural. No caso dos monômeros, os raios de giro praticamente não sofrem alteração com o estado de oxidação do átomo de ferro do grupo heme, sendo em torno de 3540 Å, com exceção do monômero da cianometa-HbGp, onde o raio de giro é 61 Å, sugerindo que, neste caso, algum tipo de agregação esteja ocorrendo.