Caracterização de polimorfismos em regiões codificadoras de miRNA da ORF K12 no genoma do hespesvirus humano do tipo 8: comparação das variantes de HHV-8 entre grupos de indivíduos com e sem sarcoma de Kaposi associado a AIDS

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Oliveira, Natan Ponzoni Galvani de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Herpesvirus human 8; Herpesvirus humano 8; HIV; Kaposi's Sarcoma; MicroRNAs; ORF K12; Saliva; Sarcoma de Kaposi
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5134/tde-01032024-120740/

Introdução. O Herpesvirus Humano do tipo 8 (HHV-8) é o agente etiológico do sarcoma de Kaposi (SK). Embora os casos de SK-aids tenham reduzido drasticamente após a terapia antirretroviral (ARTc) e reconstituição imune, essa forma continua sendo a mais agressiva e resistente ao tratamento. Polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs) no genoma do HHV-8 têm sido recentemente relacionados com a produção alterada de microRNAs (miRNA), considerados marcadores do processo neoplásico. Esses miRNAs são codificados na região da ORF K12 e loci adjacentes. Objetivo. Caracterizar SNPs presentes no locus ORF K12 do genoma do HHV-8, que codificam dois miRNAs, comparando isolados de HHV-8 entre indivíduos vivendo com HIV com e sem SK-aids em relação aos dados clínicos-epidemiológicos, demográficos e laboratoriais a partir de uma casuística de conveniência de 740 indivíduos vivendo com HIV sem histórico de SK e 52 com SK-aids, ambos sob uso de ARTc. Material e Métodos. Um teste de PCR em tempo real da ORF 73 do HHV-8 foi otimizado para a detecção mais sensível da carga viral de HHV-8 e selecionar as amostras dos isolados de DNA. Testes de PCR em tempo real foram aplicados para avaliar e comparar a presença e carga viral de outros hespesvirus entre os grupos com e sem SK-aids. O sequenciamento de DNA pelo método de Sanger foi aplicado para descrever e comparar o perfil de SNPs na ORF K12 do genoma do HHV-8. Resultados. Otimizamos o qPCR para HHV-8 com eficiência de 92,9% (Slope: -3,5; Y-intercept: 40,4; R2 = 1), sensibilidade analítica de 50 cópias/ml, sendo a detecção mais sensível de HHV-8 confirmada na saliva. A frequência de DNA de HHV-8 na saliva foi de 14,1% no grupo não-SK e de 51,9% no grupo SK-aids. A excreção salivar de EBV predominou entre os herpesvirus em ambos os grupos e a carga viral do EBV foi maior no grupo -SK-aids. Em ambos os grupos predominou o gênero masculino, faixa etária em torno de 40 anos, com títulos de EBV salivares inversamente proporcional aos níveis de CD4 circulantes e diretamente proporcional aos níveis de HIV plasmático, evento especialmente observado no grupo SK-aids. Ao todo, cinquenta sequências da ORF K12 foram obtidas partir do DNA salivar de 32 indivíduos não-SK e 18 com SK-aids. Descrevemos 30 sítios polimórficos totalizando uma taxa média de SNPs de 1,96 no grupo SK e de 5,3 no grupo não-SK ao longo da ORF K12. Polimorfismos foram predominantes no loci K12-10a, igualmente reconhecidos em outras sequências de HHV-8 de referência do genBank. Os genótipos A/C e B foram inferidos por meio da reconstrução filogenética da ORF K12, observando maior frequência do genótipo A/C no grupo não-SK, porém sem diferença estatística entre os grupos (p=0,3281). Conclusão. A coexcreção salivar de HHV-8 e EBV, associada a alta carga de EBV podem ser marcadores complementares úteis do status imune, assim como a contagem de CD4 e níveis plasmáticos de HIV. Polimorfismos na região que codifica o miRNA 12-10a e trechos adjacentes foram observados na região da ORF K12, não havendo diferença entre os grupos estudados. Mais estudos que caracterizem esses alvos que codifiquem miRNA do genoma do HHV-8 na saliva são necessários diante da potencial perspectiva da busca de biomarcadores do tumor na saliva