Estudos estruturais cristalográficos do inibidor de α-amilase 0,19 de Triticum aestivum (Trigo-cultivar IAPAR Igapó-28)

• Ano de defesa: 1998
• Autor(a) principal: Iulek, Jorge
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: α-amylase inhibitor; Triticum aestivum; cristalografia de proteínas; inibidor de α-amilase; protein crystallography; trigo; wheat
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75131/tde-12082025-152232/

Apresentam-se os resultados obtidos durante a determinação da estrutura tridimensional do inibidor de α-amilase do trigo 0,19, cultivar IAPAR Igapó-28. A proteína foi extraída do germe de trigo, purificada e submetida a ensaios de cristalização. As condições adequadas para a formação de cristais foram determinadas como tampão Tris-HCl 0,1 M, pH 7,37,5, na presença de MgCl2 0,10,2 M e PEG 8000 ou PEG 20000 a 1420% (m/V). Dados de difração de raios X foram coletados até 2,1 Å de resolução em fonte de laboratório e até 1,7 Å utilizando radiação síncrotron. Estudos de conteúdo de solvente indicaram inicialmente a presença de quatro monômeros por unidade assimétrica, o que foi confirmado após a determinação completa da estrutura. Vários compostos de átomos pesados foram testados, mas apenas Hg(C2H3O2)2, trans-Pt(NH3)2Cl2 e K2[Pt(NO2)4] produziram derivados. No entanto, esses derivados não foram suficientes para gerar mapas de densidade eletrônica interpretáveis. Tentou-se substituição molecular com o único modelo disponível no início do estudo a estrutura tridimensional do inibidor bifuncional do milheto indiano, resolvida por ressonância magnética nuclear , mas sem sucesso. Entretanto, com a publicação recente da estrutura do inibidor de α-amilase de um cultivar japonês, foi possível realizar a substituição molecular com êxito. O modelo final refinado contém moléculas de água e apresenta, em cada monômero, 373 aminoácidos e 214 moléculas de água. Cada monômero é formado por cinco hélices , organizadas em uma topologia sobe e desce, e duas pequenas fitas antiparalelas. Visualmente, a estrutura mostrou-se semelhante à do cultivar japonês. Contudo, estabeleceu-se que a prolina na posição 15 apresenta conformação cis, fato não relatado no estudo do cultivar japonês. Os sítios de platina de um dos derivados obtidos foram caracterizados, mostrando interação com o Trp51. Hipóteses foram levantadas sobre a região de interação do inibidor com as α-amilases. Por fim, discutem-se as perspectivas futuras e a continuidade do projeto, com o objetivo de esclarecer o mecanismo e as especificidades dos inibidores de α-amilase.