Efeitos da expressão heteróloga estável ou adição exógena dos fatores de crescimento TGF-1 e PDGF-BB sobre a cinética de crescimento de células CHO e HEK.

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Tagliani, Martino Reinhardt
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Biotecnologia; Cell culture; CHO; Cultivo celular; Fatores de crescimento; Growth factors; Growth kinetics; HEK; Heterologous expression; PDGF-BB; Proteínas recombinantes; Recombinant proteins; TGF-?1
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/3/3137/tde-26042023-145710/

Tecnologias de manipulação genética e cultivo de células animais são amplamente utilizadas para obtenção de proteínas contendo modificações pós-traducionais incompatíveis com sistemas de expressão microbianos, como o caso da maioria dos fatores peptídicos de crescimento (FC). Estas proteínas multifuncionais possuem uma diversa gama de aplicações clínicas e de pesquisa, notadamente em medicina regenerativa e engenharia de tecidos. A maioria dos FC recombinantes disponíveis comercialmente são obtidos a partir do cultivo de células de mamífero, sendo estas suscetíveis à sinalização e regulação por essas mesmas moléculas, as quais, inclusive, são componentes comuns de meios de cultura, onde desempenham funções mitogênicas cruciais. Contudo, há poucos relatos sobre impactos da expressão heteróloga de FC sobre a performance de crescimento de células de mamífero hospedeiras, apesar dos indícios de que estas proteínas poderiam estimular a proliferação celular e reduzir a dependência por soro animal em processos de cultivo. No presente estudo, linhagens celulares contínuas CHO-DG44 e HEK293T foram cultivadas em paralelo a sublinhagens apresentando expressão estável de TGF-1 e PDGF-BB, em meio basal Alpha-MEM e DMEM, respectivamente. As curvas de crescimento e parâmetros cinéticos de cultivos aderidos em placas de 24 poços foram determinados e comparados entre células produtoras de FC e parentais cultivadas com três concentrações de soro fetal bovino (SFB), que naturalmente contém FC, e com três condições de aplicação exógena de FC. Nenhum efeito estimulador foi observado com as células HEK, mas a expressão heteróloga de TGF-1 pelas células CHO elevou a velocidade máxima específica de crescimento de forma inversamente proporcional à concentração de SFB no meio, e levou a concentrações máximas de célula 2-5 vezes maiores. O efeito observado aqui indica um boa direção de pesquisa para o desenvolvimento de fórmulas de meio de cultura livre de soro animal e estratégias de otimização de bioprocessos.