Avaliação dos efeitos do agonista canabinóide WIN55212-2 no modelo celular de deleção da klotho.

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Possebom, Isabela Ribeiro
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Endocannabinoid system; Klotho; Neurogênese; Neurogenesis; Sistema endocanabinóide
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-24092024-155209/

O processo da neurogênese, onde são formados neurônios a partir de células Progenitoras neurais (CPNs) é importante para a manutenção do circuito neural e homeostase do sistema nervoso central (SNC). A diminuição do processo de neurogênese está associada com um declínio cognitivo e doenças neurodegenerativas. Mas, para que a manipulação da neurogênese seja uma estratégia terapêutica aplicável, é necessário compreender a fundo seus mecanismos e funções respectivas. Estudos recentes têm descrito que a deficiência da proteína Klotho pode afetar negativamente o processo de neurogênese no hipocampo. Além disso, o agonista canabinóide WIN55212-2 demonstrou ser capaz de promover a neurogênese em CPNs. O objetivo do presente projeto foi avaliar a influência da hipofunção da proteína Klotho gerada pela mutação de apenas um alelo do gene da Klotho; bem como, a ação do agonista canabinóide WIN55212-2 no processo de neurogênese. Para atingir tal objetivo foram utilizados embriões de camundongos da linhagem Klotho na idade entre 14,5-16,5 dias de desenvolvimento, dos genótipos selvagem (Kl+/+) e heterozigoto (Kl+/-). Pela dissecação do telencéfalo foi gerada uma cultura de CPNs que foi utilizada nos seguintes ensaios: 1) Ensaios de viabilidade celular, Brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil) -2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT) e liberação de lactato desidrogenase (LDH) para padronização da concentração doWIN55212-2; 2) Ensaios de proliferação na ausência e presença do WIN55212-2; 3) Ensaios de diferenciação celular na ausência e presença do WIN55212-2. Os dados foram analisados estatisticamente pelo teste t de Student não pareado, ANOVA de 1, ou 2 vias. As diferenças foram consideradas significativas para valor de p < 0,05. Nenhuma das concentrações do WIN55212-2 em 48horas (20; 10; 5; 2, 5 e 0,5 <font face = \"symbol\">mM) aumentou a citotoxicidade celular em comparação com o controle, dimetilformaldeído (DMF). No ensaio de proliferação, não houve diferenças significativas entre os genótipos, apenas uma tendência de aumento no número de neuroesferas kl +/-(n=5), em comparação com o grupo controle, Kl+/+(n=5). Já no ensaio de diferenciação, as neuroesferas kl+/- (n=4) apresentaram uma diminuição na intensidade total de fluorescência do CB2 em comparação com as kl+/+. O tratamento com o WIN 55212-2 não alterou significativamente os parâmetros quantificados nos ensaios de proliferação e diferenciação. Assim, observamos que as neuroesferas de embriões kl+/- tiveram uma diminuição da fluorescência de CB2 no ensaio de diferenciação. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais (CEUA 4028260422).