Construção de epiderme equivalente em matrizes poliméricas para avaliação de ensaios bioquímicos
Ano de defesa: | 2021 |
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Tipo de documento: | Tese |
Tipo de acesso: | Acesso aberto |
Idioma: | por |
Instituição de defesa: |
Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
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Link de acesso: | https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-09082023-182411/ |
Resumo: | Este trabalho teve como objetivo a construção de epiderme humana in vitro sobre arcabouços de matriz de polímeros sintéticos sem colágeno. Esses arcabouços foram obtidos de malhas, as quais foram fabricadas utilizando-se a técnica de eletrofiação. Os polímeros usados foram o poli (tereftalato de etileno), o poli (tereftalato de butileno) e o náilon 6,6. As malhas eletrofiadas foram caracterizadas em função de suas morfologias, distribuição de diâmetro de fibras, propriedades térmicas, porosidade e ângulo de contato. A avaliação in vitro da viabilidade das células (fibroblastos ou queratinócitos) cultivadas sobre malhas revelaram aumento da viabilidade de 1 para 7 dias. Para as construções epidérmicas in vitro foram seguidos dois protocolos: modelos de pele de completa (derme e epiderme) e epiderme humana reconstruída (RHE). Após as construções in vitro, suas morfologias foram caracterizadas por análise histológica (coloração com hematoxilina e eosina). Os resultados revelaram que a construção RHE sobre malhas eletrofiadas de náilon 6,6 (N-RHE) apresenta morfologia semelhante à da epiderme humana. No modelo N-RHE, a presença de proteínas expressas na estratificação (citoqueratina 10 e 14, involucrina e loricrina) foi confirmada por imunohistoquímica e análise de Western blotting. Finalmente, a aplicabilidade do modelo N-RHE como plataforma para a realização de ensaios de corrosão e irritação cutânea foi avaliada segundo as diretrizes sugeridas pela OECD para modelos in vitro epidérmicos. Conclui-se que o modelo NRHE apresenta estratificação adequada e funcionalidade específica, semelhante aos modelos clássicos de epiderme reconstruída, representando uma plataforma promissora na avaliação do potencial de irritação/corrosão dérmica de produtos químicos, uma vez que foram constatados apenas danos típicos relacionados à exposição da pele com substâncias corrosivas e/ou irritantes, avaliados por ensaios de viabilidade relativa e análise histológica. |
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Construção de epiderme equivalente em matrizes poliméricas para avaliação de ensaios bioquímicosConstruction of epidermal equivalent in polymeric scaffolds for evaluation of biochemical assaysCorrosão/irritação cutâneaElectrospinningEletrofiaçãoEpiderme in vitroEpidermis in vitroPele in vitroSkin corrosion/irritationSkin in vitroEste trabalho teve como objetivo a construção de epiderme humana in vitro sobre arcabouços de matriz de polímeros sintéticos sem colágeno. Esses arcabouços foram obtidos de malhas, as quais foram fabricadas utilizando-se a técnica de eletrofiação. Os polímeros usados foram o poli (tereftalato de etileno), o poli (tereftalato de butileno) e o náilon 6,6. As malhas eletrofiadas foram caracterizadas em função de suas morfologias, distribuição de diâmetro de fibras, propriedades térmicas, porosidade e ângulo de contato. A avaliação in vitro da viabilidade das células (fibroblastos ou queratinócitos) cultivadas sobre malhas revelaram aumento da viabilidade de 1 para 7 dias. Para as construções epidérmicas in vitro foram seguidos dois protocolos: modelos de pele de completa (derme e epiderme) e epiderme humana reconstruída (RHE). Após as construções in vitro, suas morfologias foram caracterizadas por análise histológica (coloração com hematoxilina e eosina). Os resultados revelaram que a construção RHE sobre malhas eletrofiadas de náilon 6,6 (N-RHE) apresenta morfologia semelhante à da epiderme humana. No modelo N-RHE, a presença de proteínas expressas na estratificação (citoqueratina 10 e 14, involucrina e loricrina) foi confirmada por imunohistoquímica e análise de Western blotting. Finalmente, a aplicabilidade do modelo N-RHE como plataforma para a realização de ensaios de corrosão e irritação cutânea foi avaliada segundo as diretrizes sugeridas pela OECD para modelos in vitro epidérmicos. Conclui-se que o modelo NRHE apresenta estratificação adequada e funcionalidade específica, semelhante aos modelos clássicos de epiderme reconstruída, representando uma plataforma promissora na avaliação do potencial de irritação/corrosão dérmica de produtos químicos, uma vez que foram constatados apenas danos típicos relacionados à exposição da pele com substâncias corrosivas e/ou irritantes, avaliados por ensaios de viabilidade relativa e análise histológica.This study aimed at the construction of human epidermis in vitro on scaffolds made of synthetic polymers collagen free. These scaffolds were obtained from meshes, which were produced using the electrospinning techniques. The polymers used were polyethylene terephthalate, polybutylene terephtalate, and nylon 6,6. Electrospun meshes were characterized by their morphology, fiber diameter distribution, thermal properties, porosity, and contact angle. in vitro evaluation of cell viability (fibroblasts or keratinocytes) cultivated onto the meshes revealed increased viability from 1 to 7 days. For the in vitro epidermal constructs, two protocols were followed: full-thickness skin and reconstructed human epidermis (RHE) models. After in vitro constructs, their morphologies were analyzed by histological analysis (hematoxylin and eosin staining). The results revealed that the RHE construct on nylon 6,6 electrospun meshes (N-RHE) presents morphology similar to that of the human epidermis. In the N-RHE model, the presence of proteins involved in the epidermis stratification process (cytokeratin 10 e 14, involucrin, and loricrin) was confirmed by immunohistochemistry and Western Blotting analysis. Finally, the applicability of the N-RHE model as a platform to perform corrosion and skin irritation assays was evaluated according to the guidelines suggested by the OECD for in vitro epidermal models. It is concluded that the N-RHE model presents adequate stratification and specific functionality, similar to the classic models of reconstructed epidermis, representing a promising platform for assessing the dermal irritation/corrosion potential of chemicals, as only typical damages related to skin exposure to corrosive and/or irritant substances were found, as assessed by relative viability tests and histological analysis.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPCatalani, Luiz HenriqueMaria-Engler, Silvya Stuchi Camarena, Denisse Esther Mallaupoma2021-09-10info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46136/tde-09082023-182411/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPLiberar o conteúdo para acesso público.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2023-08-25T12:03:02Zoai:teses.usp.br:tde-09082023-182411Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212023-08-25T12:03:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false |
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