Desenvolvimento e validação de um método para análise de sinvastatina e sinvastatina hidroxiácida por LC-MS/MS em plasma

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Vasconcelos, Mayrla Emilia Dantas
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Bioanalytical validation; Chemometrics; Green chemistry; Química verde; Quimiometria; Validação bioanalítica
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-19082025-173718/

A química analítica verde é uma abordagem inovadora que visa desenvolver métodos e técnicas analíticas mais sustentáveis e ecologicamente corretas. A aplicação da quimiometria e do desenho experimental busca a otimização e adaptação aos parâmetros da química verde, permitindo a realização de um menor número de experimentos, minimizando assim o desperdício de solventes. A combinação destas abordagens não só otimiza o processo de desenvolvimento, mas também representa um passo significativo em direção a práticas analíticas mais responsáveis e sustentáveis. Este trabalho teve como objetivo desenvolver e validar um método bioanalítico para quantificação de sinvastatina lactona (SVL) e sinvastatina hidroxiácida (SVA) no plasma de pacientes aplicando quimiometria através de planejamento experimental (DoE) na otimização de uma extração líquido-líquido e avaliação do grau de sustentabilidade do método por meio de diferentes métodos de avaliação \"greeness\". O método foi aplicado a um estudo farmacocinético concebido para avaliar o efeito da cirurgia de bypass gástrico na exposição a SVL e SVA. Um método em LC-MS/MS foi desenvolvido utilizando uma coluna Ascentis Express C18 (150 × 4,6 mm, 2,7 um), fase móvel em modo de eluição isocrática (10:90) água + 0,2% de ácido fórmico e metanol, com vazão de 0,7 mL/min e uma temperatura de 40°C. A identificação foi realizada utilizando um espectrômetro de massa triplo quadrupolo equipado com uma fonte de ionização por eletrospray (ESI) com monitoramento de múltiplas reações (MRM) onde dois modos de ionização foram utilizados tendo a fluvastatina como padrão interno (PI) em ambos os métodos: ESI + para SVL (m/z 441→325) e PI (412→266); ESI - para SVA (m/z 435→315) e PI (410→210). A condição de extração foi definida através do uso de quimiometria para realizar um menor número de experimentos e minimizar a geração de resíduos. O DoE foi aplicado a um método de extração líquido-líquido, onde inicialmente foi realizado um planejamento fatorial fracionado com 4 fatores: volume de acetato de etila, tempo de centrifugação, volume da solução tampão e pH da solução tampão, em dois níveis (+ e -) seguido de um delineamento composto central com os fatores mais significativos: volume de acetato de etila e volume de solução tampão. Para maximizar a recuperação dos analitos SVL e SVA em uma extração simultânea, foi realizado um teste de desejabilidade. A seguinte condição foi definida como condição ótima de extração: 1 mL de acetato de etila, 173 µL de solução tampão de acetato de amônio pH 5 (10mM) e tempo de extração de 15 minutos. Para avaliar a sustentabilidade do método, o método GAPI não foi um bom preditor de nível \"greeness\" do método, já o software AGREEprep determinou uma pontuação de sustentabilidade substancial de 0,62, considerando fatores como toxicidade de solventes, geração de resíduos, eficiência energética e segurança humana. Apesar das limitações analíticas, como equipamentos que consomem muita energia e solventes de alto custo, o método se alinha aos princípios da química verde. O método demonstrou seletividade, precisão e linearidade, com uma faixa linear de 0,3 ng/mL - 40 ng/mL para SVL e SVA, conforme definido pela diretriz ICH M10. O método validado foi então aplicado com sucesso em amostras de pacientes.