Padronização e aplicação de painel baseado em sequenciamento paralelo em larga escala direcionado ao diagnóstico genético de neoplasia endócrina múltipla tipo 1

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Urtremari, Betsaida
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Biologia molecular; Doenças genéticas; Endocrinologia; Endocrinology; Genetic diseases; Genética; Genetics; Large-scale parallel sequencing; Molecular biology; Multiple endocrine neoplasia type 1; Neoplasia endócrina múltipla tipo 1; Sequenciamento paralelo em larga escala
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-29012020-122521/

A neoplasia endócrina múltipla tipo 1 (MEN1) é uma doença genética, de herança autossômica dominante, caracterizada pelo desenvolvimento de tumores endócrinos que acometem, principalmente, hipófise, paratireoide e pâncreas/duodeno endócrinos. Entretanto, tumores acometendo outras glândulas endócrinas bem como vários outros tecidos não endócrinos têm sido reportados incluindo tumores nas adrenais, em pulmão, timo, entre outros. MEN1 é causada, principalmente, por mutação germinativa no gene MEN1 (11q13). Subsequentemente, outros genes (CDKN2B/p15, CDKN2C/p18 CDKN1A/p21, CDKN1B/p27 e AIP) foram relacionados à síndrome MEN1 por fenótipos condizentes com MEN1. Consensos internacionais tem sistematicamente sugerido a análise do gene MEN1 e, mais recentemente, dos genes relacionados a MEN1, em um número crescente de fenótipos que não encontram os critérios clínicos de diagnóstico de MEN1, mas que são suspeitos para esta síndrome. Alguns exemplos destas condições são: hiperparatireoidismo primário (HPT) por adenoma diagnosticado em idade jovem ( < 30 anos) ou por hiperplasia independente de idade, HPT recorrente, gastrinomas, tumores endócrinos multifocais do pâncreas, apresentações atípicas de MEN1, entre outras. Entretanto, não se tem observado sistematicamente, na prática clínica, a realização de análise genética destes diversos grupos de pacientes com graus variáveis de risco potencial de MEN1. De fato, análise de mutação germinativa tem sido dirigida, principalmente, para pacientes com diagnóstico clínico de MEN1 familial clássica. Isto se deve, em parte, pelo desconhecimento de clínicos sobre a indicação de análise genética destes subgrupos de pacientes, pelas limitações (necessidade de sequenciamento de múltiplos genes e ausência de \"hot spots\" mutacionais) e elevada custo-efetividade do Sequenciamento Sanger (SS) para suportar o diagnóstico genético de MEN1 para todas estas condições na prática clínica. Assim, neste estudo, nós pretendemos incorporar à prática médica um painel genético baseado em sequenciamento paralelo em larga escala que vem sendo validado em nosso Serviço. A padronização de análise por NGS direcionada ao gene MEN1 resultou em elevada acurácia na detecção de mutações e em melhor custo-efetividade com capacidade potencial para substituir o SS. Os objetivos do presente estudo são: 1) padronizar técnica de sequenciamento gênico capaz de proporcionar a análise genética completa e integrada de todos os genes relacionados a MEN1 conhecidos (genes MEN1, CDKN2B/p15, CDKN2C/p18 CDKN1A/p21, CDKN1B/p27Kip1 e AIP ) permitindo tanto a avaliação de casos com MEN1 familial como de todos os casos com MEN1 ou condições clínicas associadas a MEN1 (MEN1 esporádica, casos atípicos ou suspeitos de MEN1 e indivíduos com tumores MEN1-relacionados aparentemente esporádicos); 2) propiciar, pela avaliação genética completa, o aprimoramento do aconselhamento genético destas diferentes populações. Foram analisados, inicialmente, pelo menos 40 pacientes com fenótipo de MEN1 esporádica ou com suspeita clínica de MEN1; 20 pacientes com tumores neuroendócrinos pancreáticos aparentemente esporádicos e/ou multifocais, 20 pacientes com HPT primário por idade jovem ou por hiperplasia ou por recorrência.. Em etapa inicial do presente projeto foi necessária a otimização da amplificação de \"long range PCR\" para todos genes MEN1-relacionados com nova enzima em decorrência de descontinuação do uso de enzima anterior que já havia sido otimizada previamente em nosso Serviço. Também, um painel por sequenciamento paralelo em larga escala foi conduzido para análise de 25 pacientes com MEN1 esporádica e variantes patogênicas/potencialmente patogênicas foram identificadas no gene MEN1 em 2 pacientes. Posteriormente mais 39 pacientes foram submetidos a sequenciamento e nenhuma alteração patogênica foi encontrada