Silenciamento gênico por RNA de interferência (RNAi) para controle de Diatraea saccharalis por expressão de dsRNA em Pantoea agglomerans 33.1.

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Baba Junior, Ricardo Yoshio
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Broca da cana-de-açúcar; dsRNA; Endofítico; Endophytes; Insect-pests; Insetos-praga; Lepidoptera; Sugarcane borer
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/64/64133/tde-12092025-083221/

Diatraea saccharalis é considerada uma das principais pragas da cana-de-açúcar, e os danos econômicos gerados à cultura são bastante consideráveis, havendo uma demanda por novos métodos de controle. A técnica de RNA de interferência (RNAi) representa uma tecnologia inovadora que permite controlar pragas de forma específica com baixa toxicidade intrínseca. RNAi é um mecanismo de regulação pós-transcricional, desencadeado por exposição a RNA em fita dupla (dsRNA) de sequência homóloga a um gene-alvo. A entrega de moléculas de dsRNA homólogas a genes essenciais de um organismo pode levar ao silenciamento gênico, que pode resultar em prejuízos para o desenvolvimento da espécie afetada, ou até mesmo sua morte. O uso de entrega oral por micro-organismos (oral delivery by microbes) apresenta como vantagem o custo reduzido pela produção em escala e a maior proteção das moléculas de dsRNA contra a degradação no ambiente e no inseto. O objetivo deste trabalho foi avaliar o silenciamento de genes de D. saccharalis, utilizando como plataforma de entrega de dsRNA a bactéria endofítica Pantoea agglomerans 33.1 contendo o gene rnc nocauteado de modo a reduzir a degradação interna do dsRNA. Essa linhagem foi previamente desenvolvida no nosso laboratório. Foi avaliada a capacidade de colonização pela P. agglomerans 33.1:rnc em plantas de cana-de-açúcar expressando gfp por microscopia confocal, reisolamento e amplificação enzimática quantitativa (qPCR). O método de entrega das bactérias expressando dsRNA foi por meio de dieta artificial para avaliar os efeitos de silenciamento dos genes alvo Quitina Sintase (CHI), Juvenile Hormone Epoxide Hydrolase (JHEH), Neverland (NVD) e RNAi efficiency-related nuclease (REase) em lagartas de D. saccharalis. Foram avaliados os parâmetros: mortalidade e peso das lagartas, além de avaliar a expressão relativa dos genes alvo nas lagartas. A bactéria endofítica apresentou uma capacidade de colonizar tecidos radiculares e o interior dos colmos das plantas de cana-de-açúcar, demonstrando ser boa candidata para entrega de dsRNA. A aplicação da entrega de dsRNA por bactérias via dieta artificial deve ser aperfeiçoada, pois requer que a dieta não contenha nenhum anticontaminante, sendo frequentemente contaminada, dificultando o estudo a longo prazo. A ausência de efeitos de silenciamento apresentados corrobora com o observado em diversos estudos com insetos da ordem Lepidoptera, que apresentam uma maior recalcitrância ao RNAi que outras ordens de insetos