Produção de antígenos recombinantes para desenvolvimento de diagnóstico de leucose enzoótica bovina e neosporose

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Ferreira, Luciane Xavier
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Neospora caninum; Antígenos; Antigens; Bovine leukemia virus; Diagnose; Diagnóstico; Proteínas recombinantes; Recombinant protein; Vírus da leucemia bovina
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60141/tde-29042025-133925/

Neosporose e leucose enzoótica bovina (LEB) são doenças de alta soroprevalência em rebanho bovino que ocasionam perdas bilionárias para a cadeia produtiva. A neosporose é causada pela infecção do protozoário Neospora caninum e a LEB é desenvolvida em bovinos infectados com o vírus da leucemia bovina (VLB). Tanto para neosporose quanto para LEB não existem vacinas e tratamentos medicamentosos economicamente viáveis para animais de produção, sendo utilizado como medidas de controle o diagnóstico e manejo dos animais. Contudo, a depender da região, a acessibilidade ao diagnóstico é baixa para ambas as doenças, assim, perpetuando a transmissão e infecção do parasita e vírus. Em vista disso, o presente projeto tem como objetivo produzir antígenos recombinantes solúveis em tampões salinos para compor, no futuro, kits de diagnósticos, como os imunocromatográficos, visando aumentar a disponibilidade de diagnósticos para neosporose e LEB no Brasil. Os antígenos alvos foram: NcSAG1 e NcSRS2 para neosporose e VLBp24 para LEB. Em análise in sílico com ferramentas de bioinformática foi possível predizer estruturas, domínios, propriedades químicas e epítopos das proteínas. Regiões selecionadas dos genes dos antígenos foram clonados em pGEM-t-easy e pET28a(+), transformados em Escherichia coli (TOP10 e BL21) e expressos em E. coli BL21(DE3) por IPTG e autoindução. A purificação das proteínas ocorreu por coluna de níquel, e anticorpos policlonais de cada proteína foram produzidos em camundongos BALB/c. O potencial antigênico dos antígenos foi avaliado por ELISA, onde foi possível determinar a máxima diluição dos soros policlonais frente aos seus antígenos, tendo sido 1:128.000, 1:16.000 e 1:2.000 para VLBp24, NcSAG1 e NcSRS2 respectivamente. O reconhecimento dos anticorpos contra seus respectivos antígenos recombinantes foi confirmado por Western blot. Os anticorpos anti-NcSAG1 reconheceram extratos de taquizoítas de N. caninum por ELISA (p < 0,05) e por Western blot. Ademais, foi observado o reconhecimento de dímeros de NcSAG1 em Western blot do antígeno purificado e extrato de taquizoíta. Por fim, avaliou-se o potencial dos anticorpos anti-NcSAG1 e anti-NcSRS2 na inibição da invasão do parasita, sendo que apenas com a combinação dos anticorpos foi possível uma inibição significativa (p < 0,05). Desta forma, as proteínas do presente trabalho foram produzidas de forma solúvel em tampão salino e confirmado seus potenciais antigênicos, assim, oportunizando a composição futura de ensaios imunocromatográficos com estes antígenos.