Análise de possíveis peptídeos imunogênicos da proteína lectina do tipo 1 de Toxocara canis para o aprimoramento do imunodiagnóstico em modelo murino experimental

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Fonseca, Gabriela Rodrigues e
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Camundongo; Immunodiagnosis; Imunodiagnóstico; Mice; Peptídeo sintético; Synthetic peptide; Toxocara canis
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5134/tde-26112024-134349/

Nematódeos do gênero Toxocara são responsáveis pela toxocaríase, zoonose de abrangência mundial, mas negligenciada. Em humanos, seus hospedeiros paratênicos, Toxocara pode causar larva migrans visceral e ocular, toxocaríase oculta e neurotoxocaríase. O diagnóstico é realizado por detecção de anticorpos contra antígenos de excreção-secreção do parasito, mas apresenta desvantagens como reatividade-cruzada. É possível aprimorar o diagnóstico ao associar inovação e o estudo da dinâmica da infecção. Assim, o presente estudo tem a finalidade de identificar peptídeos sintéticos da lectina do tipo C 1 de Toxocara canis (Tc-CTL-1) e avaliar sua aplicação em métodos imunodiagnósticos. Camundongos BALB/c foram divididos em grupos saudáveis e inoculados com T. canis, Strongyloides venezuelensis, Schistosoma mansoni e Ascaris suum. Os animais foram anestesiados e eutanasiados após uma, duas, 4 ou 6, 8, 12 e 22 semanas de infecção. Os peptídeos foram selecionados in silico e experimentalmente por Dot-blot e ELISA. A análise in silico foi realizada em conjunto por quatro programas de predição de peptídeos de células B, análise de homologia pelo BLASTp, modelagem 3D da proteína e identificação de peptídeo sinal. Foram selecionados peptídeos com 50% ou mais da sua sequência identificado por ao menos dois programas, presentes em sua maioria em regiões coil, não participantes de sequências de peptídeo-sinal, homóloga à proteína Tc-CTL-1, com menor e-value e maior porcentagem de identificação. Os peptídeos selecionados in silico foram sintetizados por técnica SPOT, testados e avaliados por Dot-blot. Foram selecionados peptídeos com maior imunogenicidade e menor reatividade-cruzada para posterior síntese de peptídeos em fase sólida e análise pela técnica de ELISA. Cinquenta e cinco peptídeos foram selecionados pela análise in silico. No Dot-blot, houve reconhecimento intenso dos peptídeos pelo IgG anti-Toxocara, mas houve reatividade-cruzada com animais inoculados com A. suum. Quatro peptídeos foram sintetizados e avaliados por ELISA, que apresentaram resultados inconsistentes. A discrepância nos resultados entra as duas técnicas diagnósticas indicam a possibilidade de proteínas de outros parasitos com sequências peptídicas idênticas às da Tc-CTL-1, mas ainda não descritas ou inclusas em banco de dados. Ademais, há necessidade de aprofundar os estudos translacionais e aplicados sobre a aplicação de peptídeos sintéticos às diversas plataformas de imunodiagnóstico. Logo, peptídeos sintéticos devem ser considerados como um novo caminho para a inovação do diagnóstico da toxocaríase