Detecção e rastreamento de mutações no proto-oncogene RET em pacientes com neoplasia endócrina múltipla tipo 2 por meio de eletroforese em gel sensível à conformação

• Ano de defesa: 2007
• Autor(a) principal: Santos, Marcelo Augusto Cortina Gonçalves dos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Análise mutacional de DNA/métodos Reação em cadeia por polimerase/métodos; Carcinoma medular/genética; DNA mutational analyses/methods; Electrophoresis/methods; Eletroforese/métodos; Medullary carcinoma/genetic; Multiple endocrine neoplasia type 2A/genetic; Multiple endocrine neoplasia type 2B/genetic; Mutação/genética; Mutation/genetic; Neoplasia endócrina múltipla tipo 2A/genética; Neoplasia endócrina múltipla tipo 2B/genética; Neoplasias da tireóide/diagnóstico; Polymerase chain reaction/methods; Proto-oncogene/genetic; Proto-oncogenes/genética; Thyroid neoplasia/diagnosis
• Link de acesso: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5135/tde-06062007-170334/

A neoplasia endócrina múltipla tipo 2 (NEM-2) é uma síndrome tumoral herdada por mutações germinativas no proto-oncogene RET (RET) e transmitida por herança autossômica dominante. Atualmente, a indicação de tireoidectomia total preventiva é recomendada a indivíduos portadores de mutações no RET. Analisamos a aplicação do método Eletroforese em Gel Sensível à Conformação (CSGE) no rastreamento de mutações hot-spots do RET. Sete famílias com NEM-2 foram rastreadas pelo CSGE, seqüenciamento gênico e análise do Polimorfismo Conformacional de Cadeia Simples (SSCP). Usando o CSGE e SSCP, identificamos cinco das seis (83,3%) mutações verificadas pelo seqüenciamento: Cys620Arg, Cys634Arg, Cys634Tyr, Val648Ile e Met918Thr. Foram analisados 128 amplicons englobando mutações hot-spots do RET e 116 dentre 128 (90.6%) concordaram com o seqüenciamento genético. Os polimorfismos 691 e 769 também foram documentados pelo CSGE e SSCP. Os dados obtidos por CSGE e SSCP foram totalmente (100%) concordantes. O CSGE revelou ser metodologia sensível, rápida, fácil de ser executada e de baixo custo na detecção de mutações nos códons 620, 634, 648, e 918, as quais constituem grande maioria (~95%) dos pacientes com NEM-2. Quanto à mutação Val804Met (prevalência na população inferior a 3%), o método necessita ser otimizado. Concluímos que o CSGE é uma metodologia efetiva para o rastreamento de mutações que mais freqüentemente ocorrem no RET como causadora de NEM-2.