Caracterização do mecanismo de ação da seriniquinona e derivados sintéticos em modelos celulares de melanoma.

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Hirata, Amanda Soares
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Adesão; Adhesion; Autofagia; Autophagy; Dermcidin; Dermicidina; Estresse de Retículo; Natural Products; Produtos Naturais; Reticulum Stress
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-22012025-154217/

A seriniquinona (SQ) é um produto natural isolado da bactéria marinha Serinicoccus sp. e com propriedades antitumorais únicas. Além de sua seletividade para células de melanoma, a SQ apresentou a dermicidina como alvo molecular, desencadeando autofagia e apoptose. O melanoma é o câncer de pele mais agressivo devido ao seu alto índice de metástase e resistência à quimioterapia, que ainda carece de tratamentos eficazes. Por conta da baixa solubilidade da substância, foram realizadas pequenas alterações estruturais na SQ, além de tentar aprimorar sua seletividade e toxicidade para células de melanoma. Assim, o estudo objetivou caracterizar a atividade citotóxica e o mecanismo de ação das substâncias SQ e derivados sintéticos, relacionando com a função da dermicidina. Após triagem em diversas linhagens celulares, o derivado sintético SQ2 foi escolhido para prosseguir os estudos, juntamente com a SQ1, de caracterização do efeito nas linhagens SK-MEL-28 (BRAFV600E) e SK-MEL-147 (NRASQ61R), que carregam as duas mutações mais prevalentes no melanoma. A partir dos ensaios de MTT, clonogênico, qPCR e western blot, pode-se observar diferentes respostas entre as linhagens e entre as substâncias SQ1 e SQ2, onde a SK-MEL-28 foi mais sensível. Com a utilização de inibidores de autofagia, concluiu-se que a inibição da autofagia em células que já possuem maior atividade autofágica basal pode levá-las a apoptose, como visto nas células BRAFV600E. Por outro lado, a autofagia pode se transformar em um processo citotóxico em células que possuem esse mecanismo suprimido, como ocorreu nas células NRASQ61R, que apresentou maior resistência as seriniquinonas quando a autofagia se encontrava inibida. Sendo assim, esse estudo reforça a importância de se investigar a combinação de um inibidor autofágico com a quimioterapia para tumores NRAS mutantes, como já vem sido explorado para os BRAF mutantes. Na segunda parte do trabalho foram estudadas as células SK-MEL-28 (parental) e SK-MEL-28R, resistentes ao vemurafenibe, que se mostraram sensíveis ao tratamento por apenas 6h e 12h com a SQ pelos ensaios de MTT e clonogênico. No modelo de pele reconstruída, tumores de ambas as linhagens apresentaram redução no tamanho e na invasão da derme com a SQ, somada a segurança para os tecidos saudáveis. Por RNA-seq, a transcriptômica revelou a ativação do estresse do retículo endoplasmático pela SQ, validada em ambas as linhagens pela superexpressão das proteínas GRP78, p-eIF2<font face = \"symbol\">a e XBP1s. Na literatura, a dermicidina já foi relatada ligada à GRP78 modulando a migração pela via Wnt/<font face = \"symbol\">b-catenina; especialmente para SK-MEL-28R, o tratamento de 6h diminuiu em 98% a capacidade de adesão; a N-caderina e a <font face = \"symbol\">b-catenina também foram reduzidas; além da célula SK-MEL-173, que apresenta maior atividade da <font face = \"symbol\">b-catenina, foi resistente a SQ. Análises de bancos de sequenciamento com amostras de pacientes correlacionam com os efeitos observados no RNA seq das células tratadas com SQ. Por fim, a SQ demonstrou potente atividade contra o melanoma, especialmente na resistente. Sua importância como novo candidato a fármaco também reside na sua seletividade e segurança para a pele. Nossos resultados têm apontado consistentemente para interação dermicidina-GRP78 como reguladores da adesão celular e consequente migração.