Estudos analíticos instrumentais de metabólitos secundários produzidos por bactérias endofíticas e fitopatógenas de citros

• Ano de defesa: 2005
• Autor(a) principal: Simionato, Ana Valeria Colnaghi
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: xylella fastidiosa; xanthomonas campestris; CE-MS; CE-UV; difuseble signal factors; fatores sinais difusíveis; GC-MS; LC-UV; siderofores; sideróforos
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75132/tde-07082025-143621/

Este projeto teve como objetivo a investigação de metabólitos secundários sintetizados in vitro por bactérias fitopatogênicas (Xyella fastid iosa Xf ) e endofíticas (linhagens de Methylobacterium), que estão associadas a doenças em citros. Padrões de metabólitos também foram investigados. Desta forma, técnicas instrumentais, tais como eletroforese capilar (CE), cromatografia líquida (HPLC), cromatografia gasosa (GC) e espectrometria de massas (MS), foram empregadas. Os metabólitos investigados foram sideróforos e fatores sinais difusíveis (DSF). Os sideróforos são peptídeos de síntese não-ribossomal com baixa massa molecular (ca. 500 à 2000 Da) e alta afinidade por ferro. Estes metabólitos são produzidos e secretados por microorganismos sob estresse de ferro para seqüestrar este elemento do ambiente externo ou do hospedeiro. Portanto, os sideróforos são fatores patogênicos em potencial já que seqüestram um elemento essencial ao hospedeiro. A investigação sobre o mecanismo de fragmentação de padrões de sideróforos foi realizada por espectrometria de massas em \"tandem\", revelando as clivagens preferenciais destas biomoléculas . As técnicas de CE-MS e CE-UV foram usadas para analisar extratos de Methylobacterium in vitro. Diferentes sideróforos foram detectados de acordo com a espécie de bactéria. Uma das linhagens de Methylobacterium foi selecionada para ser analisada por CE-MS/MS levando a identificação de possíveis resíduos de aminoácidos presentes no sideróforo. A estequiometria e as constantes condicionais de formação de alguns complexos metal-deferoxamina, um padrão de sideróforo, foram investigados por eletroforese capilar de zona (CZE) usando o método da variação contínua. Esta é uma novidade em relação a análise de complexos metálicos já que este método nunca foi realizado por CZE. Os DSFs são moléculas sinalizadoras que ativam o mecanismo de \"quorum sensing\" dos microorganismos levando à síntese de fatores patogênicos. O DSF produzido pela fitobactéria Xanthomonas campestris pv. Campestris é um ácido graxo α-β instaurado ramificado e a literatura apresenta fortes evidências de que a Xf também produz uma molécula de DSF similar. Os resultados obtidos pelas análises por HPLC e GC-MS de extratos de Xf in vitro comfirmaram esta similaridade já que a molécula de DSF identificada é, provavelmente , o ácido 12-metil­ tetradecanóico.