Purificação e caracterização da PLA2 do plasma seminal de Capra hircus

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Franco, Hélio José Antunes
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: caprinos; chromatography; cromatografia; electrophoresis; eletroforese; espectrometria de massas; fosfolipase A2; goats; mass spectrometry; medicina veterinária; phospholipase A2; plasma seminal; seminal plasma; veterinary medicine
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75135/tde-24112025-153750/

O Brasil nas últimas décadas vem se destacando no cenário mundial no que se tange a agricultura e pecuária. Esses setores são os grandes pilares da economia nacional levando o país a se destacar não só em termos econômicos, mas também em investimentos nessa área. O destaque para a caprinocultura brasileira se encontra na região do semiárido nordestino com rebanhos de dupla aptidão, ou seja, leite e carne. Segundo dados do IBGE (2020) 95 % do rebanho nacional se encontra nessa área do pais, mostrando um crescimento de 9.817.007 de cabeças em 2016 para 12.101.298 em 2020. Dessa forma, pesquisas que possam melhorar e alavancar essa área são extremamente importantes. Diante desse fato, o presente trabalho teve por objetivo contribuir com o desenvolvimento científico nesse setor, com revisões da literatura, conhecimentos sobre reprodução animal e reações envolvidas, bem como focar na fosfolipase A2, enzima fundamental durante os processos reprodutivos. As amostras deste trabalho são oriundas do plasma seminal de caprinos sem raça definida e da raça Canindé. Num primeiro momento, usando-se ferramentas de bioinformática, buscou-se conhecer mais sobre a enzima, como sua sequência de aminoácidos, sua estrutura secundária, ponto isoelético, potencial de carga da sua estrutura e seu perfil proteico. Numa segunda etapa, para o plasma seminal, foram feitas análises de eletroforese bidimensional, isoeletrofocalização em OFFGEL, testes de atividade enzimática e espectrometria de massas. Para as etapas cromatográficas foram usadas colunas de exclusão por tamanho e troca iônica. As frações de PLA2 após a puricação também foram submetidas as análises mencionadas e espectroscopia de dicroísmo circular. Os experimentos mostraram que frações com modificações do espectro de dicroísmo não apresentaram atividade biológica, como esperado. Os resultados obtidos de forma experimental ficaram em consonância aos modelos teóricos e através da análise em conjunto de todas as técnicas utilizadas, bem como dados da literatura, evidenciaram que a enzima fosfolipase A2, de plasma seminal de caprinos sem raça definida e da raça Canindé foram purificados e caraterizados apresentando ponto isoelétrico de 5,4 e massa de 12,42 KDa.