Impacto da via de sinalização AMPK na modulação da resposta imune antitumoral por linfócitos T CD4+ e CD8+

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Feitosa, Amanda Campelo Lima Melo
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: AMPK; Key-words; Melanoma; Melanoma; Linfócito T; AMPK; mTOR; Metformina; Metformin; mTOR; T cells
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-18122019-110528/

Já foi descrito que o tratamento com metformina interfere no desenvolvimento e na progressão de tumores. Além da atuação direta através das modificações geradas no metabolismo, a metformina impacta a atividade das células do sistema imune e da célula tumoral, levando a modificações no microambiente tumoral que podem ser benéficas ou não. Sabendo que o efeito da metformina é em parte devido à ativação das vias AMPK e mTOR, formulamos a hipótese de que a ausência da via AMPK no linfócito T CD4&#43 e CD8&#43 influenciaria a progressão do melanoma murino B16F10. Portanto, o objetivo deste trabalho é avaliar se o impacto da via metabólica da AMPK em linfócitos T é capaz de alterar o processo de desenvolvimento tumoral no modelo de melanoma murino, bem como compreender quais são os mecanismos imunes efetores envolvidos neste processo. Em um trabalho prévio já publicado pelo nosso grupo, mostramos que, in vivo, a metformina apresenta um efeito antitumoral significativo. Vimos que esse efeito é parcialmente dependente do sistema imune e que os linfócitos T possuem um importante papel nessa proteção. Sabendo disto, utilizamos animais do sistema Cre-lox que não possuíam AMPK (CD4cre&#43AMPKfl/fl) e Raptor (CD4cre+Raptorfl/fl) no linfócito T CD4&#43 e CD8&#43. Vimos que os animais CD4cre&#43AMPKfl/fl são protegidos do desenvolvimento tumoral nos dois modelos de melanoma analisados e que os pulmões com tumor destes animais possuem uma menor população de linfócitos T CD4&#43, CD4&#43PD-1&#43, T CD8&#43PD-1&#43, uma maior população de linfócitos T CD8&#43IFN-&#43 bem como uma menor população de linfócitos T CD4+ no baço e no tumor primário destes animais. Vimos ainda no pulmão dos animais CD4cre&#43AMPKfl/fl com tumor, uma maior expressão relativa do genes tnf- e hk-2. Quanto aos animais CD4cre&#43Raptorfl/fl observamos que estes possuem também um menor desenvolvimento de metástases pulmonares e uma maior sobrevida em relação aos animais controle. Mostramos também que a deleção de AMPK não é capaz de alterar a proliferação de linfócitos T e nem interferir na diferenciação destas células em células Tregs. Já o tratamento de linfócitos T CD4&#43 ativados com metformina foi capaz de alterar a proliferação destas células de maneira independente de AMPK nos linfócitos T bem como interferiu na diferenciação de células Tregs apenas nos animais CD4cre&#43AMPKfl/fl. Quanto ao metabolismo, vimos que a deleção de AMPK nos linfócitos T diminuiu a massa mitocondrial e o potencial de membrana de linfócitos T CD4&#43 ativados, porém não interferiu na respiração celular destas células (OXPHOS). Já quando tratamos estas células com metformina, notamos que os linfócitos T CD4+ de ambos os animais usados fazem menos OXPHOS, mostrando que esse efeito é independente da via AMPK nos linfócitos T, além de reduzir a massa mitocondrial de maneira dependente de AMPK nos linfócitos T. Juntos, estes resultados sugerem que AMPK e mTORC1 no linfócito T é prejudicial no contexto do melanoma murino B16F10 e que a deleção de AMPK nos linfócitos T CD4&#43 e CD8&#43 altera aspectos imunes e metabólicos.