Edição dos genes CSN2 (β-caseína) e LGB (β-lactoglobulina) por CRISPR/Cas9 em células MAC-T como modelo de produção de proteínas recombinantes

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2023
Autor(a) principal: Mariano Júnior, Clésio Gomes
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Bos taurus
CRISPR/Cas
Edição gênica
Gene-editing
Proteína recombinante
Recombinant protein
Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74135/tde-29052025-083903/
Resumo: A produção e comercialização de proteínas recombinantes é um mercado bilionário e em constante expansão. Devido às limitações dos modelos de produção em bactérias e leveduras foram surgindo métodos alternativos, como os baseados em células de mamíferos. Uma das abordagens mais promissoras neste sentido é a de produzir proteínas recombinantes nas glândulas mamárias de bovinos aproveitando toda a maquinaria molecular de expressão proteica no leite desses animais e substituindo as duas principais proteínas nele presentes, a β-caseína (CSN2) e a β-lactoglobulina (LGB) por outras proteínas de interesse comercial. Com isso, este projeto teve como objetivo nocautear estes genes em células de glândula mamária de Bos taurus pela tecnologia CRISPR/Cas9. Para o estabelecimento da linhagem celular editada foram padronizadas todas as etapas de edição gênica, que incluem o desenho e montagem dos RNAs guia do sistema CRISPR/Cas9, transfecção das células MAC-T, sequenciamento, análise da frequência de indels, citometria de fluxo e separação das células por sorting, geração, seleção e validação dos clones editados. Nas transfecções realizadas por Lipofectamina obtivemos eficiência máxima de 1,9% e após análises não foi possível encontrar clones com edições por CRISPR/Cas9 nos genes CSN2 e LGB.
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