Explorando a diversidade genômica da série Parviflorae e do complexo \'Cattleya briegeri\' (Orchidaceae): de linhagens crípticas ao genoma de referência

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2025
Autor(a) principal: Garcia, Caroline Bertocco
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-03122025-164754/
Resumo: O complexo \'Cattleya briegeri\', formado por orquídeas rupícolas endêmicas dos campos rupestres da Cadeia do Espinhaço (Minas Gerais, Brasil), apresenta um cenário evolutivo complexo, caracterizado por diversificação recente, hibridação ativa e padrões genéticos intrincados. Nesta tese, utilizamos uma abordagem integrativa baseada em dados genômicos nucleares (SNPs via genotipagem por sequenciamento - GBS), plastidiais (genomas completos de cloroplastos) e de montagem do genoma parcial de alta qualidade para investigar as relações evolutivas, a delimitação de espécies e a estrutura genética do grupo. As análises populacionais e filogenéticas baseadas em dados SNPs revelaram a existência de onze linhagens com suporte como espécies independentes, incluindo táxons não descritos formalmente (sspA, sspB), com alta exclusividade alélica e ausência de sinais de mistura genética, sugerindo a presença de espécies crípticas. Em contrapartida, linhagens morfologicamente reconhecidas, como C. aromatica, C. presidentensis e C. guaicuhyensis, não apresentaram isolamento genético suficiente, sendo reinterpretadas como variações intraespecíficas. A ocorrência de zonas híbridas e padrões reticulados indicam que a hibridação natural exerce papel central na diversificação do complexo, favorecendo a formação de novos ecótipos ou espécies incipientes. Complementarmente, a montagem e anotação de genomas completos de cloroplastos de nove espécies da série Parviflorae, incluindo representantes do complexo briegeri e um da série Microlaelia, demonstraram conservação estrutural e genética entre os plastomas, com variações em regiões intergênicas e presença de microssatélites (cpSSR). A filogenia plastidial, baseada no alinhamento completo das quatro regiões do cloroplasto, resultou em uma topologia bem resolvida, recuperando o complexo como monofilético (exceto C. bradei) e fornecendo suporte robusto para as relações evolutivas no grupo. As regiões hotspot de variabilidade destacam-se como potenciais marcadores moleculares para estudos intra e interespecíficos. No terceiro capítulo, avançamos para a dimensão genômica de referência ao apresentar o primeiro genoma completo para o gênero Cattleya, obtido a partir de C. milleri, uma espécie microendêmica e criticamente ameaçada do Quadrilátero Ferrífero. A estratégia híbrida, combinando leituras longas de Oxford Nanopore Technologies® e PacBio HiFi, resultou em uma montagem altamente contínua (2,02 Gb, N50 de 27,1 Mb, 94,8% de completude BUSCO), posicionando este recurso entre os genomas de orquídeas mais completos já publicados. Além de suprir a ausência de genomas de referência no gênero, este recurso oferece suporte para a obtenção de SNPs em larga escala, ampliando a resolução de estudos de delimitação de espécies, filogenia e evolução populacional da série Parviflorae. O genoma de C. milleri também abre novas frentes de pesquisa funcionais, incluindo a anotação de vias de pigmentação floral, a aplicação de ferramentas de edição gênica (CRISPR-Cas9), e a exploração das interações simbióticas com fungos micorrízicos e endofíticos por meio de abordagens transcriptômicas e metagenômicas. Destaca-se, ainda, a relevância metodológica da condução de etapas críticas de extração e sequenciamento em território nacional, fortalecendo a autonomia científica brasileira em genômica de plantas. Em conjunto, os resultados obtidos nesta tese reforçam a importância de abordagens integrativas que unem genômica populacional, filogenômica e recursos genômicos de referência para compreender a evolução de complexos de espécies jovens e morfologicamente similares. Além de oferecer subsídios para revisões taxonômicas e identificação de espécies crípticas, os dados gerados consolidam bases para estratégias de conservação voltadas à singularidade genética e ecológica dos campos rupestres, ao mesmo tempo em que ampliam a capacidade científica nacional para o estudo, a conservação e o uso sustentável da biodiversidade brasileira.
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Nesta tese, utilizamos uma abordagem integrativa baseada em dados genômicos nucleares (SNPs via genotipagem por sequenciamento - GBS), plastidiais (genomas completos de cloroplastos) e de montagem do genoma parcial de alta qualidade para investigar as relações evolutivas, a delimitação de espécies e a estrutura genética do grupo. As análises populacionais e filogenéticas baseadas em dados SNPs revelaram a existência de onze linhagens com suporte como espécies independentes, incluindo táxons não descritos formalmente (sspA, sspB), com alta exclusividade alélica e ausência de sinais de mistura genética, sugerindo a presença de espécies crípticas. Em contrapartida, linhagens morfologicamente reconhecidas, como C. aromatica, C. presidentensis e C. guaicuhyensis, não apresentaram isolamento genético suficiente, sendo reinterpretadas como variações intraespecíficas. A ocorrência de zonas híbridas e padrões reticulados indicam que a hibridação natural exerce papel central na diversificação do complexo, favorecendo a formação de novos ecótipos ou espécies incipientes. Complementarmente, a montagem e anotação de genomas completos de cloroplastos de nove espécies da série Parviflorae, incluindo representantes do complexo briegeri e um da série Microlaelia, demonstraram conservação estrutural e genética entre os plastomas, com variações em regiões intergênicas e presença de microssatélites (cpSSR). A filogenia plastidial, baseada no alinhamento completo das quatro regiões do cloroplasto, resultou em uma topologia bem resolvida, recuperando o complexo como monofilético (exceto C. bradei) e fornecendo suporte robusto para as relações evolutivas no grupo. As regiões hotspot de variabilidade destacam-se como potenciais marcadores moleculares para estudos intra e interespecíficos. No terceiro capítulo, avançamos para a dimensão genômica de referência ao apresentar o primeiro genoma completo para o gênero Cattleya, obtido a partir de C. milleri, uma espécie microendêmica e criticamente ameaçada do Quadrilátero Ferrífero. A estratégia híbrida, combinando leituras longas de Oxford Nanopore Technologies® e PacBio HiFi, resultou em uma montagem altamente contínua (2,02 Gb, N50 de 27,1 Mb, 94,8% de completude BUSCO), posicionando este recurso entre os genomas de orquídeas mais completos já publicados. Além de suprir a ausência de genomas de referência no gênero, este recurso oferece suporte para a obtenção de SNPs em larga escala, ampliando a resolução de estudos de delimitação de espécies, filogenia e evolução populacional da série Parviflorae. O genoma de C. milleri também abre novas frentes de pesquisa funcionais, incluindo a anotação de vias de pigmentação floral, a aplicação de ferramentas de edição gênica (CRISPR-Cas9), e a exploração das interações simbióticas com fungos micorrízicos e endofíticos por meio de abordagens transcriptômicas e metagenômicas. Destaca-se, ainda, a relevância metodológica da condução de etapas críticas de extração e sequenciamento em território nacional, fortalecendo a autonomia científica brasileira em genômica de plantas. Em conjunto, os resultados obtidos nesta tese reforçam a importância de abordagens integrativas que unem genômica populacional, filogenômica e recursos genômicos de referência para compreender a evolução de complexos de espécies jovens e morfologicamente similares. Além de oferecer subsídios para revisões taxonômicas e identificação de espécies crípticas, os dados gerados consolidam bases para estratégias de conservação voltadas à singularidade genética e ecológica dos campos rupestres, ao mesmo tempo em que ampliam a capacidade científica nacional para o estudo, a conservação e o uso sustentável da biodiversidade brasileira.The \'Cattleya briegeri\' complex, composed of rupicolous orchids endemic to the rocky outcrops of the Espinhaço Range (Minas Gerais, Brazil), presents a complex evolutionary scenario characterized by recent diversification, active hybridization, and intricate genetic patterns. In this thesis, we employed an integrative approach based on nuclear genomic data (SNPs via genotyping-by-sequencing, GBS), plastidial data (complete chloroplast genomes), and the partial assembly of a high-quality nuclear genome to investigate evolutionary relationships, species delimitation, and the genetic structure of the group. Population and phylogenetic analyses based on SNP data revealed the existence of eleven lineages supported as independent species, including undescribed taxa (sspA, sspB), with high allelic exclusivity and no evidence of genetic admixture, suggesting the presence of cryptic species. In contrast, morphologically recognized lineages such as C. aromatica, C. presidentensis, and C. guaicuhyensis did not show sufficient genetic isolation, being reinterpreted as intraspecific variation. The occurrence of hybrid zones and reticulate patterns indicates that natural hybridization plays a central role in the diversification of the complex, favoring the emergence of new ecotypes or incipient species. Complementarily, the assembly and annotation of complete chloroplast genomes from nine species of the Parviflorae series, including representatives of the briegeri complex and one of the Microlaelia series, revealed structural and genetic conservation among plastomes, with variation in intergenic regions and the presence of microsatellites (cpSSRs). The plastid phylogeny, based on the complete alignment of the four chloroplast regions, resulted in a well-resolved topology, recovering the complex as monophyletic (except for C. bradei) and providing strong support for evolutionary relationships within the group. Identified hotspot regions of variability stand out as potential molecular markers for intra- and interspecific studies. In the third chapter, we advanced towards reference genomics by presenting the first complete genome for the genus Cattleya, obtained from C. milleri, a microendemic and critically endangered species from the Quadrilátero Ferrífero. The hybrid strategy, combining long reads from Oxford Nanopore Technologies® (ONT) (PromethION) and PacBio® HiFi, yielded a highly contiguous assembly (2.02 Gb, N50 of 27.1 Mb, 94.8% BUSCO completeness), placing this resource among the most complete orchid genomes published to date. In addition to filling the gap of reference genomes in the genus, this resource supports large-scale SNP discovery, enhancing the resolution of species delimitation, phylogenetic, and population genomic studies of the Parviflorae series. The C. milleri genome also opens new functional research avenues, including the annotation of floral pigmentation pathways using RNA-Seq data, the application of gene-editing tools (CRISPR-Cas9), and the exploration of symbiotic interactions with mycorrhizal and endophytic fungi through transcriptomic and metagenomic approaches. Furthermore, it is worth highlighting the methodological relevance of conducting critical stages of DNA extraction and sequencing within Brazil, strengthening national scientific autonomy in plant genomics. Taken together, the results of this thesis emphasize the importance of integrative approaches that combine population genomics, phylogenomics, and reference genomic resources to understand the evolution of young and morphologically similar species complexes. In addition to providing a basis for taxonomic revisions and the identification of cryptic species, the generated data consolidate the foundations for conservation strategies focused on the genetic and ecological uniqueness of rupestrian grasslands, while simultaneously enhancing national scientific capacity for the study, conservation, and sustainable use of Brazilian biodiversity.Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USPBerg, Cassio van DenZucchi, Maria ImaculadaGarcia, Caroline Bertocco2025-09-29info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-03122025-164754/reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USPinstname:Universidade de São Paulo (USP)instacron:USPReter o conteúdo por motivos de patente, publicação e/ou direitos autoriais.info:eu-repo/semantics/openAccesspor2025-12-05T12:38:02Zoai:teses.usp.br:tde-03122025-164754Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://www.teses.usp.br/PUBhttp://www.teses.usp.br/cgi-bin/mtd2br.plvirginia@if.usp.br|| atendimento@aguia.usp.br||virginia@if.usp.bropendoar:27212025-12-05T12:38:02Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP - Universidade de São Paulo (USP)false
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description O complexo \'Cattleya briegeri\', formado por orquídeas rupícolas endêmicas dos campos rupestres da Cadeia do Espinhaço (Minas Gerais, Brasil), apresenta um cenário evolutivo complexo, caracterizado por diversificação recente, hibridação ativa e padrões genéticos intrincados. Nesta tese, utilizamos uma abordagem integrativa baseada em dados genômicos nucleares (SNPs via genotipagem por sequenciamento - GBS), plastidiais (genomas completos de cloroplastos) e de montagem do genoma parcial de alta qualidade para investigar as relações evolutivas, a delimitação de espécies e a estrutura genética do grupo. As análises populacionais e filogenéticas baseadas em dados SNPs revelaram a existência de onze linhagens com suporte como espécies independentes, incluindo táxons não descritos formalmente (sspA, sspB), com alta exclusividade alélica e ausência de sinais de mistura genética, sugerindo a presença de espécies crípticas. Em contrapartida, linhagens morfologicamente reconhecidas, como C. aromatica, C. presidentensis e C. guaicuhyensis, não apresentaram isolamento genético suficiente, sendo reinterpretadas como variações intraespecíficas. A ocorrência de zonas híbridas e padrões reticulados indicam que a hibridação natural exerce papel central na diversificação do complexo, favorecendo a formação de novos ecótipos ou espécies incipientes. Complementarmente, a montagem e anotação de genomas completos de cloroplastos de nove espécies da série Parviflorae, incluindo representantes do complexo briegeri e um da série Microlaelia, demonstraram conservação estrutural e genética entre os plastomas, com variações em regiões intergênicas e presença de microssatélites (cpSSR). A filogenia plastidial, baseada no alinhamento completo das quatro regiões do cloroplasto, resultou em uma topologia bem resolvida, recuperando o complexo como monofilético (exceto C. bradei) e fornecendo suporte robusto para as relações evolutivas no grupo. As regiões hotspot de variabilidade destacam-se como potenciais marcadores moleculares para estudos intra e interespecíficos. No terceiro capítulo, avançamos para a dimensão genômica de referência ao apresentar o primeiro genoma completo para o gênero Cattleya, obtido a partir de C. milleri, uma espécie microendêmica e criticamente ameaçada do Quadrilátero Ferrífero. A estratégia híbrida, combinando leituras longas de Oxford Nanopore Technologies® e PacBio HiFi, resultou em uma montagem altamente contínua (2,02 Gb, N50 de 27,1 Mb, 94,8% de completude BUSCO), posicionando este recurso entre os genomas de orquídeas mais completos já publicados. Além de suprir a ausência de genomas de referência no gênero, este recurso oferece suporte para a obtenção de SNPs em larga escala, ampliando a resolução de estudos de delimitação de espécies, filogenia e evolução populacional da série Parviflorae. O genoma de C. milleri também abre novas frentes de pesquisa funcionais, incluindo a anotação de vias de pigmentação floral, a aplicação de ferramentas de edição gênica (CRISPR-Cas9), e a exploração das interações simbióticas com fungos micorrízicos e endofíticos por meio de abordagens transcriptômicas e metagenômicas. Destaca-se, ainda, a relevância metodológica da condução de etapas críticas de extração e sequenciamento em território nacional, fortalecendo a autonomia científica brasileira em genômica de plantas. Em conjunto, os resultados obtidos nesta tese reforçam a importância de abordagens integrativas que unem genômica populacional, filogenômica e recursos genômicos de referência para compreender a evolução de complexos de espécies jovens e morfologicamente similares. Além de oferecer subsídios para revisões taxonômicas e identificação de espécies crípticas, os dados gerados consolidam bases para estratégias de conservação voltadas à singularidade genética e ecológica dos campos rupestres, ao mesmo tempo em que ampliam a capacidade científica nacional para o estudo, a conservação e o uso sustentável da biodiversidade brasileira.
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