SARS-CoV-2 em tecidos linfoides secundários de pacientes e hamsters experimentalmente infectados

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Lima, Thais Melquiades de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Adenotonsilectomia; Adenotonsillectomy; Persistência viral; SARS-CoV-2; Tonsilas e adenoides; Tonsils and adenoids; Viral persistence
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-24092025-111442/

No presente estudo, mostramos que o SARS-CoV-2 pode infectar tonsilas palatinas, adenoides e secreções em crianças sem sintomas de COVID-19, sem histórico de infecção recente das vias aéreas superiores. Estudamos 48 crianças submetidas a amigdalectomia devido a ronco/AOSA ou amigdalite recorrente entre outubro de 2020 e setembro de 2021. Citobrushes nasais, lavagens nasais e fragmentos de tecido tonsilar obtidos na cirurgia foram testados por RT-qPCR, imuno-histoquímica (IHQ), citometria de fluxo e ensaio de neutralização. Detectamos a presença do SARS-CoV-2 em pelo menos um espécime testado em 27% dos pacientes. O IHQ revelou a presença da nucleoproteína viral na superfície epitelial e em células linfoides em regiões extrafoliculares e foliculares, em adenoides e tonsilas palatinas. Além disso, o IHC para a proteína não estrutural NSP-16 do SARS-CoV-2 indicou a presença de replicação viral em 53,8% dos tecidos infectados pelo SARS-CoV-2. A citometria de fluxo mostrou que os linfócitos B CD20 + foram os fenótipos mais infectados, seguidos pelos linfócitos CD4+ e células dendríticas CD123, linfócitos T CD8+ e macrófagos CD14+. Além disso, o IF indicou que os tecidos tonsilares infectados tinham expressão aumentada de ACE2 e TMPRSS2. O sequenciamento NGS demonstrou a presença de diferentes variantes do SARS-CoV-2 em amígdalas de diferentes tecidos. A detecção do antígeno SARS-CoV-2 não foi restrita às amígdalas, mas também foi detectada em células nasais da região olfativa. Na infecção in vitro as células mononucleares de tonsilares se mostraram susceptíveis, mas não permissíveis a infecção. As amígdalas palatinas e adenoides são locais de presença prolongada de RNA pelo SARS-CoV-2 em crianças, mesmo sem sintomas de COVID-19. No modelo experimental em hamsters dourados reproduziu aspectos clínicos e imunológicos da infecção humana, com perda de peso na fase aguda, ampla disseminação viral inicial e forte ativação inflamatória nos pulmões. A RT-qPCR detectou RNA viral em pulmão, cérebro e linfonodos por até 365 dias pós-infecção, mesmo sem sinais de replicação ativa. O pulmão foi o principal sítio de persistência viral e resposta inflamatória, com elevação de citocinas pró-inflamatórias aos 3 dias pós-infecção. A expressão de TGF-α permaneceu aumentada após um ano, indicando possíveis processos crônicos de reparo tecidual. A expressão de ACE2 também aumentou no início da infecção em todos os grupos. A resposta imune adaptativa foi confirmada pela detecção sustentada de anticorpos IgG específicos contra o vírus. Em conjunto, esses achados reforçam a relevância dos modelos estudados para compreender os mecanismos de persistência viral, a resposta imune local e sistêmica, e as possíveis consequências tardias da infecção por SARS-CoV-2.