Estudo funcional da complementação de cepa cyp3Δ de Saccharomyces cerevisiae pelo gene PPIF que codifica a Ciclofilina D humana

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2023
Autor(a) principal: Pereira, Fábio
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
CRP3
PPIF
Saccharomyces cerevisiae
Ciclofilina D
Cyclophilin D
Docagem molecular
Molecular docking
Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-17052024-111712/
Resumo: A Ciclofilina D humana (CyDh) é uma peptidil-prolilcis-trans isomerase de matriz mitocondrial codificada pelo gene PPIF, cujo ortólogo em Saccharomyces cerevisiae é CPR3. CyDh atua na regulação da abertura do Poro de Transição de Permeabilidade Mitocondrial (MPTP) que, quando aberto, libera íons Ca2+ da mitocôndria para o citoplasma. Uma abertura prolongada do MPTP pode ser a principal causa de diversas doenças relacionadas à disfunção mitocondrial, tais como doenças relacionadas a lesões cardíacas; distrofia muscular causada por deficiência em colágeno VI; danos e traumas cerebrais; hepatotoxicidade por acetaminofeno; esclerose lateral amiotrófica; e esclerose múltipla. O objetivo deste projeto consistiu em complementar a cepa haplóideatg1Δ cpr3Δ de levedura com o gene PPIF humano, e realizar ensaios in vivo com pequenas moléculas com potencial inibitório da CyD humana. Essa cepa resultante foi utilizada em análise funcional com moléculas provenientes de um ensaio (triagem) virtual. Aqui são mostrados os resultados provenientes do processo de construção da cepa atg1Δcpr3Δ PPIF, da expressão da CyD humana em célula bacteriana, da validação do método de ensaio virtual (redocking) escolhido para este trabalho, além da identificação dos sítios de ligação e dos principais resíduos de aminoácidos que participam da interação receptorligante, e da obtenção dos ligantes Z29739412, Z3223725733, Z27916418 para a CyDh através da docagem molecular, que tiveram sua eficácia verificada em curvas de crescimento, de onde se obtiveram as taxas de crescimento (growth-rates) e a máxima absorbância a 600 nm (Max-A600). Os resultados destes experimentos mostram que PPIF complementa a cepa cpr3Δ e o ligante Z3223725733 foi o mais eficaz em inibir o crescimento das células, portanto, pode representar um potencial fármaco em terapia para as doenças supracitadas.
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