Canais ativados por ATP extracelular em células de Leydig de camundongos

• Ano de defesa: 2008
• Autor(a) principal: Antonio, Ligia Subitoni
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: ATP; Células de Leydig; Eletrofisiologia; lmunofluorescência; Não informado.; Receptores purinérgicos; Western blot
• Link de acesso: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17134/tde-08042026-164945/

Nos últimos anos, o ATP tem sido alvo de estudo em vários aspectos ligados à sinalização intercelular. Há evidências de que ele possa atuar tanto exercendo a função de mediador de eventos rápidos, como na neurotransmissão, como também em processos celulares de longo prazo, envolvendo mecanismos ligados à proteína G. A ação do ATP na membrana celular se dá por meio de receptores purinérgicos do tipo P2X (canais iônicos ativados por ligantes) e P2Y (receptores acoplados à proteína G). Até o momento, já foram identificados e clonados sete subtipos de receptores P2X (P2X1 - P2X7). O influxo de cálcio (Ca2+) por esses canais justifica em parte o aumento da concentração de Ca2+ intracelular ([Ca2+]i) observado em algumas situações fisiológicas, o que evidencia que esta é uma importante via envolvida nas respostas mediadas por receptores P2X \"in vivo\". O tratamento de células de Leydig de ratos e camundongos, com ATP, causa aumento na [Ca2+]i e na secreção de testosterona, reforçando a hipótese de que a sinalização via Ca2+ pode contribuir para o controle da secreção de testosterona nessas células. Os receptores purinérgicos descritos em células de Leydig de camundongos apresentam perfil farmacológico e eletrofisiológico característico do subtipo P2X2. Além disso, existem evidências de que o influxo de Ca2+ (gerado pela abertura do receptor P2X) ativa canais para K+ de alta condutância (BKCa) e que estes podem influenciar o decurso temporal da dessensibilização dos receptores P2X nessas células. Dessa forma, o presente estudo objetivou identificar os subtipos de receptores purinérgicos P2X em células de Leydig de camundongos adultos, analisando propriedades moleculares e eletrofisiológicas desses receptores, e observar se há interação entre os receptores P2X e a atividade de canais para K+ ativados por Ca2+ de alta condutância (BKCa). Experimentos de \"Western Blot\" e lmunofluorescência mostraram a presença de receptores purinérgicos dos subtipos P2X2, P2X4, P2X6 e P2X7 nas células de Leydig. Registros eletrofisiológicos, utilizando a técnica de \"patch clamp\" sugerem a presença de receptores heteroméricos, possivelmente P2X2/4/6, que exibem perfil farmacológico dominante para a subunidade P2X2 e indicam que há interação entre os canais BKCa e o influxo de Ca2+ decorrente da ativação de receptores P2X. O aumento de atividade dos canais BKCa após o influxo de Ca2+ por abertura de canais P2X é dose-dependente e reversível. Os resultados de captação de corantes fluorescentes mostram que os receptores P2X7 não são funcionais nessas células.