Investigação dos mecanismos de ativação da resposta imune inata induzida pelas vacinas rBCG-LTAK63 e rBCG-S1PT: Autofagia e ativação dos inflamassomas

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Carvalho, Ana Carolina de Oliveira
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Autofagia; Autophagy; BCG; BCG recombinante; Inflamassoma; Inflammasome; Macrófagos; Macrophages; Recombinant BCG
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24102025-153115/

Os inflamassomas são complexos intracelulares formados em resposta a estímulos patogênicos e desempenham um papel crucial na resposta imune inata inicial, essencial para o desenvolvimento de respostas imunes adaptativas adequadas. De forma semelhante, a autofagia é um processo de reciclagem celular que também desempenha um papel vital na resposta imune, potencialmente melhorando a proteção contra a tuberculose. Estudos recentes sugerem que tanto a ativação do inflamassoma quanto a autofagia durante a imunização com BCG recombinante contribuem para mecanismos de proteção. Desenvolvemos uma cepa de BCG recombinante que expressa a subunidade A desintoxicada da toxina LT de Escherichia coli (rBCG-LTAK63), que demonstrou a capacidade de induzir respostas imunes adaptativas robustas relacionadas a Th1/Th17 e fornecer proteção contra Mycobacterium tuberculosis. Outra vacina produzida em laboratório, a rBCG-S1PT, expressa a subunidade S1 geneticamente desintoxicada de Bordetella pertussis. Este estudo avaliou a ativação de inflamassomas e a indução de autofagia pelas vacinas rBCG-LTAK63 e rBCG-S1PT, com foco em seus papéis nas respostas imunes inatas e adaptativas. Macrófagos derivados da medula óssea (BMDMs) de camundongos C57BL/6, Casp-1-/-, NLRP3-/-, AIM-2-/-, AIRmax e AIRmin foram ativados com LPS ultrapuro (500 ng/mL; 4 h) e infectados com BCG Danish, rBCG-LTAK63, BCG Moreau ou rBCG-S1PT (MOI 10; 6 h). Os BMDMs estimulados com Nigericina serviram como controle positivo. A secreção de IL-1 foi quantificada por ELISA, e a expressão das proteínas IL-1, casp-1 e ASC foi analisada por Western blot. Para avaliar a indução de autofagia, células RAW 264.7 foram expostas a rBCG-LTAK63 e rBCG-S1PT. O LC3, principal biomarcador associado à autofagia, foi avaliado por Western blot. Os BMDMs foram pré-tratados com rapamicina (indutor) e infectados com BCG ou rBCG-LTAK63 para avaliar o impacto da autofagia na apresentação do antígeno. Esplenócitos de camundongos virgens foram co-cultivados com BMDMs por 48 h, e a ativação imunológica foi avaliada por citometria de fluxo. Nossos dados revelam que a ativação do inflamassoma induz uma maior produção de IL-1 pelos BMDMs em resposta à vacina rBCG-LTAK63. A maior parte da produção de IL-1 é mediada pelo inflamassoma NLRP3, e a estimulação de IL-1 é independente do AIM-2. A expressão de IL-1 depende da expressão de ASC. Além disso, rBCG-LTAK63 e rBCG-S1PT desencadeiam um aumento na delipidação de LC3B, indicada pela conversão de LC3B-I em LC3B-II em células RAW 264.7. A caracterização da ativação de células T indicou os papéis dos inflamassomas e da autofagia na geração de células TCD4+CD44+ e TCD4+CD69+, bem como na indução de citocinas da via Th1 e Th17. Este estudo fornece evidências preliminares de que o rBCG-LTAK63 desencadeia respostas imunes inatas via inflamassomas e autofagia, que são cruciais para respostas protetoras de células T mediadas por macrófagos. O envolvimento desses mecanismos imunes inatos influencia profundamente a progressão das respostas adaptativas, apoiando o potencial do rBCG-LTAK63 como um candidato promissor para o desenvolvimento de novas vacinas contra a tuberculose.