Influência da morfina sobre a produção de citocinas em equinos estimulados com LPS - Estudo in vitro e in vivo

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Rusch, Elidiane
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Equine; Equino; Immunomodulation; Imunomodulação; Opioid; Opioide; Sepse; Sepsis
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/74/74135/tde-30052025-111524/

A síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS) é uma condição inflamatória exacerbada, desencadeada, dentre outras causas, pela liberação de endotoxinas na circulação e está relacionada à falência de órgãos e morte. As causas de endotoxemia que culminam na SIRS em equinos incluem pleuropneumonia, abdome agudo, endometrite e sepse neonatal. Para evitar o desfecho da afecção, além do tratamento do fator causal, o controle na produção de citocinas e mediadores inflamatórios é almejado. Devido às propriedades imunomoduladoras constatadas em humanos, camundongos e em sinoviócitos de equinos, a morfina é um fármaco com potencial terapêutico para a SIRS em equinos em quadros endotoxêmicos. Com o estudo objetivou-se verificar a influência da morfina na produção das citocinas pró-inflamatórias IL1-β, TNF-α e IL-6 por células imunológicas de equinos in vitro e após a indução experimental de endotoxemia com lipopolissacarídeo (LPS) in vivo. Para isso, o estudo foi conduzido em duas fases. A primeira realizada in vitro, em dois ensaios, com a seleção de nove animais, com idade entre 1 e 2 anos, hígidos e sem histórico de doenças causadas por bactérias gram-negativas. Desses animais, foram coletados 20 mL de sangue, por meio de punção da veia jugular. No primeiro ensaio, 5 x 105 células foram submetidas a um dos tratamentos: LPS (controle positivo), meio diluente (controle negativo), meio com 300 µM/mL de morfina (controle negativo + morfina) e 30, 100 e 300 µM/mL de morfina com LPS. No segundo ensaio, células foram cultivadas com LPS, meio, meio com 300 µM/mL de morfina, 300 µM/mL de morfina com LPS ou 300 µM/mL de morfina + 30 µM/mL de naloxona + LPS. Após 24 horas, o sobrenadante foi coletado para análise de TNF-α, IL-1β e IL-6, por ELISA. A segunda etapa consistiu na fase in vivo em que foram selecionados 12 equinos hígidos e sem histórico de doenças causadas por bactérias gram-negativas, que receberam 100 ng/kg de LPS diluído em 250 mL de solução NaCl 0,9%, infundidos pela via intravenosa (IV) em 15 minutos. Após a indução da endotoxemia com LPS, os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos (n = 6): Morfina, os quais receberam 0,1 mg/kg de morfina IV imediatamente após a infusão de LPS; e Salina que receberam volume proporcional de NaCl 0,9%, no mesmo momento. Para análise de hemograma, fibrinogênio e mensuração de citocinas pelo método de ELISA, foram coletadas amostras antes dos tratamentos T0 (basal) e após a injeção de LPS, nos tempos 15 e 30 minutos, 1, 2, 3, 4, 5 e 6 horas. O nível de significância adotado foi de 5% (p < 0,05). Para realizar comparações estatísticas, os valores foram transformados em logaritmo. No primeiro ensaio verificou-se que a dose de 300 µM/mL de morfina reduziu a produção de IL-1β e IL-6. No segundo ensaio observou-se que a dose 300 µM/mL de morfina reduziu a produção de IL-1β e a naloxona foi capaz de antagonizar esse efeito. In vivo a morfina atenuou os sinais relacionados a dor e apatia e reduziu a produção de TNF-α e de IL-1β. Dessa maneira, verificou-se que a morfina in vitro reduziu a produção de citocinas pró-inflamatórias por células imunológicas de equinos, sendo seus efeitos parcialmente revertidos pela naloxona. Verificou-se ainda que o fármaco possui potencial imunomodulador quando administrada de forma sistêmica em equinos e não suprimiu totalmente a função imunológica.