Papel da fosforilação da proteína Orc1/Cdc6 no ciclo celular de <i>Trypanosoma cruzi</i>.

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Oliveira, Melissa Martins de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertacoes da USP; Universidade de São Paulo; Instituto de Ciências Biomédicas
• Palavras-chave em Português: CDKs; ciclo celular; interatores; Orc1Cdc6; cell cycle; interacting proteins
• Link de acesso: https://teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42135/tde-29042026-182825/

A replicação do DNA é um processo que é estritamente regulado para garantir a estabilidade genômica. Esse processo inicia-se nas origens de replicação, onde um complexo composto pelas proteínas ORC, Cdc6, Cdt1 e MCM2-7 é montado entre o fim da mitose e início da fase G1 do ciclo celular. ORC é a proteína iniciadora, conservada entre eucariotos, sendo implicada em várias funções além da replicação do DNA. No <i>Trypanosoma cruzi </i>(<i>T. cruzi</i>), agente etiológico da doença de Chagas, a proteína Orc1Cdc6 faz parte do complexo de pré-replicação, e os mecanismos de regulação e de interação com outras proteínas não estão bem definidos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a fosforilação como um possível mecanismo de modulação de Orc1Cdc6 e explorar seus possíveis interatores. Para isso, uma linhagem de parasitos marcada com as etiquetas <i>Myc </i>e TurboID (Orc1Cdc6-tag) foi gerada, validada, e caracterizada quanto a passagem do ciclo celular, proliferação, localização e expressão em formas epimastigotas do parasito. Orc1Cdc6-tag apresentou uma proliferação mais acelerada em relação ao controle e um comprometimento da fase S do ciclo celular, sendo sensível ao inibidor de CDKs, Flavopiridol. A abundância relativa de Orc1Cdc6 é constante ao longo do ciclo celular, e identificamos um possível interator de Orc1Cdc6, mais abundante em G2/M, através do TurboID. Adicionalmente, análises exploratórias de dados de proteômica indicaram outras possíveis proteínas interatoras de Orc1Cdc6, não relacionadas a replicação, abrindo um campo para investigações futuras.