Separação das proteinas de Xylella fastidiosa por métodos eletroforéticos de análise

• Ano de defesa: 2002
• Autor(a) principal: Zanluqui, Luís André
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Xylella fastidiosa; análise proteica; biologia molecular; electrophoresis; eletroforese; molecular biology; protein analysis; proteínas; proteins; SDS-PAGE; separação; separation
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75132/tde-22102025-175420/

A eletroforese capilar (CE) tem se destacado nos últimos anos como uma técnica de separação de alta freqüência analítica e resolução. Seu rápido avanço decorreu, em parte, da simplicidade instrumental, da variedade dos modos de separação que podem ser efetuados em um único instrumento e além da diversidade dos compostos passíveis de análise. Os mecanismos de separação empregados em placas de gel, também podem ser realizados em CE, com a vantagem de reduzir o tempo de análise, bem como a quantidade de amostra empregada, sendo possível uma completa automação do processo e compatibilidade com uma variedade de sistemas de detecção. No presente trabalho uma metodologia analítica para a separação das proteínas de Xylella fastidiosa foi desenvolvida utilizando a CE e comparando com a eletroforese bi-dimensional em placa de gel de poliacrilamida (20-PAGE) com o objetivo de superar as particularidades da 20-PAGE e explorar as potenc ialidades da CE. Inicialmente a metodologia analítica foi estabelecida e testada para a focalização isoelétrica capilar (CIEF), obtendo a separação de proteínas de acordo com o ponto isoelétrico das mesmas. Em seguida, foi desenvolvida e testada uma metodologia para a eletroforese capilar em gel (CGE), utilizando o extrato protéico de bactérias cultivadas em diferentes meios de cultura (PW e CBXPm7). Utilizando as mesmas técnicas de CE empregadas nas amostras de Xylella fastidiosa, foram aplicadas também em uma amostra mais simplificada e purificada (hemoglobina de Glossoscolex paulistus), comparando o desempenho da CE nas diferentes condições do analito. Os resultados demonstraram que a CE é uma técnica de grandes potencialidades para a análise das proteínas, proporcionando a mesma interpretação dos resultados obtidos com a metodologia da 20-PAGE, além da determinação exata do ponto isoelétrico e a massa molecular das proteínas detectadas.