Efeito da fotobiomodulação sobre o dano e o reparo de DNA em queratinócitos expostos ao 5-Fluorouracil

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Novaes, Cristina de Paula
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: 5-Fluorouracil; Dano e Reparo de DNA; DNA damage and repair; Fotobiomodulação; Photobiomodulation
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/23/23154/tde-21062023-113003/

O quimioterápico 5-Fluorouracil (5FU) induz efeitos genotóxicos por intermédio de quebras de fitas simples e duplas de DNA. Em resposta ao dano no DNA, as células acionam mecanismos de resposta ao dano no DNA (DDR). O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da fotobiomodulação (FBM) sobre o estresse oxidativo, o dano no DNA e a DDR em queratinócitos cutâneos previamente expostos ao 5FU. Foram estabelecidos os seguintes grupos experimentais: a) Grupo controle células HaCaT expostas ao DMSO; b) Grupo 5FU HaCaT expostas ao 5FU; c) Grupos 5FU irradiados: HaCaT expostas ao 5FU e posteriormente submetidas a 6 segundos de irradiação Grupo 6s; 10 segundos de irradiação Grupo 10s; e 20 segundos de irradiação Grupo 20s. Após 24h de exposição ao 5FU, as células foram irradiadas com três tempos diferentes (laser de diodo, 660nm±10nm, 100mW±20%, tamanho do spot de 0,09cm2, 1,1W/cm2, 6s 6,6J/cm2, 10s 11,1J/cm2 e 20s 22,2J/cm2). Para cada grupo, foram realizadas duas sessões de FBM, com intervalo de 4h entre elas. Após 24h da segunda sessão de FBM foram realizados, em todos os grupos experimentais, quantificação de espécies reativas de oxigênio (EROs) e de peroxidação lipídica (quantificação de malonaldeído (MDA)), análise de enzimas antioxidantes (quantificação da superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT)), análise do dano no DNA (ensaio cometa e quantificação de 8-oxo-dG e y-H2AX), análise da DDR (OGG1, ERCC1, ATM e p53), análise de senescência (ensaio da atividade de -galactosidade) e atividade mitocondrial (ensaio de MTS). Em geral, observou-se que a FBM em todos os tempos de irradiação reduziu quantidade de EROs derivada da exposição ao 5FU, porém provocou aumento da peroxidação lipídica; SOD e CAT foram ativadas principalmente nos tempos de 6s e 20s. O tempo de 6s acarretou aumento da quantidade de DNA na cauda do cometa, bem como de 8-oxo-dG. Já o tempo de 20s reduziu a expressão desses marcadores de dano no DNA. Todos os tempos de irradiação também induziram superexpressão de y-H2AX, indicativo ao mesmo tempo de dano de fita dupla e acionamento do reparo do DNA. OGG1, ERCC1 e ATM foram superexpressas principalmente nos tempos de 10s e 20s, sugerindo que tempos de irradiação maiores acionam o reparo no DNA em comparação a tempos de irradiação mais curtos. Houve aumento também da expressão de p53, maior porcentagem de células em senescência e menor atividade mitocondrial nos grupos irradiados em relação ao 5FU. Conclui-se que o estresse oxidativo foi modulado pela FBM, porém não foi suficiente para reduzir a peroxidação lipídica. A FBM aumentou a expressão de marcadores de dano no DNA de forma heterogênea, dependendo do tempo de irradiação, porém acionou o reparo no DNA no tempo de irradiação de 10s e principalmente de 20s. A FBM induziu senescência nas células expostas ao 5FU, interpretada como um mecanismo compensatório para o reparo no DNA, sugerindo uma ação protetora contra os efeitos genotóxicos desse quimioterápico.