Supressão da mutação &#916phoU em Pseudomonas aeruginosa

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Picinin, Nicole Gonçalves
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Pseudomonas aeruginosa; fosfato; mutação; mutation; PHO regulon; phosphate; polifosfato; polyP; Regulon PHO; suppression; supressão
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-16072024-180700/

A bactéria Pseudomas aeruginosa pode ser encontrada em diversos ambientes, tais como em corpos dagua, solo, animais e plantas. Para sobreviver e procriar em ambientes tão diversos, a bactéria possui vários sistemas gênicos que irão auxiliá-la em sua adaptação. A baixa disponibilidade de fosfato no ambiente gera a ativação dos genes pertencentes ao regulon PHO, tais como phoA, que codifica uma fosfatase alcalina periplasmática e o operon pst que codifica um sistema de captação de Pi. Cinco genes compõe o operon pst - pstA, pstB, pstC, pstS e phoU. O último gene não participa do transporte de fosfato mas atua como repressor do regulon PHO em ambientes com excesso de fosfato. O genes de PHO são regulados pelo sistema de dois componentes PhoB/PhoR, onde a proteína PhoB atua como um regulador de resposta e PhoR atua como uma histidina quinase. O nocaute do gene phoU resulta na constitutividade do regulon PHO, e consequentemente aumenta a captação de Pi via Pst. O excesso de fosfato intracelular e armazenado na forma de grânulos de polifosfato, porem o excedente de fosfato no interior da célula é tóxico gerando uma pressão seletiva para aquisição de mutações supressoras, que ocorrem geralmente em phoB ou em um dos outros 4 genes do operon pst. Neste trabalho, foram isolados e caracterizados dezenas de mutantes supressores derivados da cepa &#916phoU de P. aeruginosa. Estes mutantes foram submetidos a diversos ensaios fenotípicos, tais como, a captação de Pi do meio, o nível de acúmulo do polifosfato, e a atividade quantitativa da enzima fosfatase alcalina, entre outros. Os resultados mostram que as mutações adquiridas pelos mutantes supressores designados como NAP revertem todos os fenótipos apresentados pelo mutante &#916phoU e os tornam similares a cepa selvagem PA14, enquanto que as mutações apresentadas pelos supressores LAP revertem parte dos efeitos nocivo causados pelo excesso de Pi no interior da célula. Neste trabalho, não foi observado nenhum mutante supressor do tipo HAP, visto que todos os possíveis candidatos se assemelham, fenotipicamente, a cepa ancestral &#916phoU e nenhuma mutação relevante foi encontrada nestes isolados.