Efeito de nanovesículas extracelulares derivadas de linhagens tumorais de linfoma T cutâneo em queratinócitos imortalizados

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Torrealba, Marina Passos
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Adesão celular; Angiogenesis inducing agents; Cell adhesion; Células epidérmicas; Células HaCaT; Epidermal cells; Extracellular vesicles; HaCaT cells; Indutores da angiogênese; Inflamação; Inflammation; Micose fungoide; Micosis fungoides; Sezary syndrome; Síndrome de Sézary; Vesículas extracelulares
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5133/tde-31012023-190521/

Os linfomas cutâneos primários de células T (LCCT) são um grupo heterogêneo de linfomas não Hodgkin que se manifestam inicialmente na pele. Micose fungoide (MF) é o LCCT mais prevalente, e a síndrome de Sézary (SS) é uma variante leucêmica agressiva. A forma avançada de LCCT está correlacionada com prurido intenso, sistema imunológico disfuncional e inflamações cutâneas crônicas. De fato, infecções bacterianas são recorrentes e, pacientes em estágio avançado, muitas vezes vão a óbito em decorrência de sepse e não do tumor em si. Comprometimento da barreira cutânea e aumento na expressão de fatores angiogênicos são comuns no LCCT, entretanto, as origens dessas alterações ainda são pouco estudadas. Células tumorais influenciam e modulam o funcionamento de outras células por diferentes vias, uma delas é via secreção de nanovesículas no espaço extracelular (sEV). sEV são estruturas esféricas com bicamada lipídica que transportam em seu interior uma grande diversidade de componentes bioativos como citocinas, quimiocinas, ligantes de receptores de ativação/inibição, diferentes tipos de ácidos nucleicos, enzimas, entre outros. As sEV podem ser captadas e internalizadas por outras células, sendo consideradas mediadores da comunicação intercelular e amplamente estudadas em neoplasias. Entretanto, evidencias da contribuição de sEV para a patogênese no LCCT são escassas. Portanto, o estudo teve por objetivo obter e caracterizar o conteúdo proteico de sEV tumorais no LCCT e avaliar o efeito da captação e internalização de sEV-LCCT por queratinócitos imortalizados. sEV derivadas das linhagens tumorais de LCCT, Myla2059 (MF) e Hut78 (SS), foram obtidas de meio condicionado por protocolo baseado em centrifugação diferencial, ultrafiltração e cromatografia por exclusão de tamanho. Os parâmetros de perfil morfológico, de diâmetro (167nm e 159nm) e de expressão proteica (Hsp-70, CD81 e RAB5), avaliados respectivamente por criomicroscopia eletrônica de transmissão (Crio-TEM), análise do rastreamento de partículas (NTA) e western blotting (WB), se mostraram típicos de sEV. Identificamos, por espectrofotometria de massa (MS), 620 proteínas carreadas pelas sEV-LCCT, dentre integrinas e moléculas de adesão celular (CD62L, ALCAM/CD166, ITGB1, TGB2) marcadores relacionados a tumorigênese (CD70, LGALS1, LGALS3BP, KIT e PDGFRB) e marcadores comuns em células T (CD26, CD40LG, IL1R2, IL1RAP e IL27b). Por meio de avaliações por citometria de fluxo e de imagem, observamos que queratinócitos absorvem e captam sEV-LCCT de maneira dependente de temperatura. Após a confirmação da incorporação de sEV-LCCT para o citosol dos queratinócitos pela análise de z- stack por microscopia confocal, o perfil de expressão gênica de queratinócitos tratados com sEV- LCCT foi analisado por sequenciamento de RNA e RT-qPCR. Observamos regulação negativa de moléculas relacionadas a manutenção da barreira cutânea como filagrina, loricrina, involucrina, desmogleínas, desmocolinas e caderinas. Diversos genes relacionados com a formação da camada córnea também foram alterados (STAB1, LCE1E, HRNR e S100A8). A expressão de fatores relacionados ao processo de angiogênese (ESM1, VEGF-A-C-D, PGF) e pruritogênicos (NFG) foi maior após o tratamento com sEV-LCCT. Por fim, dentre os genes diferencialmente expressos com maior regulação positiva, observamos fatores pró-inflamatórios (CSF2, CXCL8, SERPINB2, GRZB, CXCL3 e SPRRs). Assim, concluímos que o tratamento de sEV-LCCT alterou a expressão de transcritos relacionados a via de inflamação, adesão celular e formação do envelope cornificado em queratinócitos imortalizados. Os dados são inéditos e sugerem a contribuição de sEV derivadas de células tumorais no processo de inflamação crônica, angiogênese e comprometimento da barreira cutânea no LCCT