Interação entre os sistemas endocanabinoide e nitrérgico na modulação da memória de medo e influência do sexo em comportamentos defensivos em camundongos iNOS knockout

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Ferreira, Bruna Felippe
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Endocanabinoides; Endocannabinoids; Extinção; Extinction; Memória; Memory; Nitric oxide; Óxido nitrico; PTSD; TEPT
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17133/tde-04042025-102523/

Estímulos aversivos/estressores estão envolvidos no desenvolvimento de transtornos psiquiátricos, como o transtorno de estresse pós-traumático (TEPT), e o óxido nítrico (NO) parece desempenhar um papel importante nesse processo. Uma das fontes de NO é a ativação da sintase induzível de NO (iNOS) por estresse, glutamato ou mediadores inflamatórios. Entretanto, a principal fonte de NO no encéfalo, que também é ativada pelo estresse, é a isoforma neuronal na NOS, a nNOS. A exposição ao estresse pode ativar o sistema endocanabinoide (eCB), que interage com o sistema nitrérgico na modulação de respostas relacionadas ao estresse e reações defensivas. Nesse contexto, nosso grupo demonstrou anteriormente que camundongos iNOS knockout (KO) apresentam aumento compensatório na expressão de nNOS no córtex pré-frontal medial (CPFm), mas não no hipocampo, e déficits na extinção do medo, comportamento semelhante ao observado em pacientes com TEPT. Essas alterações no sistema nitrérgico parecem estar associadas também à desregulação do sistema eCB em ambas as regiões cerebrais. Administração sistêmica de inibidores de nNOS ou da enzima amida hidrolase de ácido graxo (FAAH), que metaboliza o eCB anandamida (AEA), atenuaram os déficits comportamentais em camundongos iNOS KO. Os efeitos da AEA podem ser mediados por receptores canabinoide tipo 1 (CB1) ou vaniloide de potencial transitório tipo 1 (TRPV1), modulando a expressão de medo e ansiedade por meio de mecanismos opostos envolvendo a via NMDA/NO. Considerando o envolvimento do NO na resposta ao estresse, este trabalho investigou inicialmente se o sexo poderia influenciar o fenótipo comportamental de camundongos iNOS KO, com ênfase no processamento de memórias aversivas e comportamentos do tipo ansioso e depressivo. Foi observado que as fêmeas iNOS KO mostraram comportamentos mais ansiosos, enquanto os machos exibiram comportamentos antidepressivos no teste de nado forçado (TNF), mas apresentaram déficits na extinção da memória de medo e na evocação da memória de extinção. Não foram observados déficits cognitivos gerais em testes como o labirinto em Y e reconhecimento de objetos (RO), sugerindo que os prejuízos cognitivos dos iNOS KO parecem estar restritos à memória de medo. Os experimentos a seguir foram realizados apenas com machos. Para avaliar se a inibição farmacológica da iNOS seria suficiente para provocar déficits na memória de extinção semelhantes aos observados em animais iNOS KO, foi avaliado o efeito da administração aguda de 1400W, um inibidor seletivo da enzima iNOS, em animais WT antes do condicionamento ou antes da re-exposição ao contexto do condicionamento. O 1400W (0,75; 1,5; 3 µg/kg) não reproduziu os efeitos observados em animais iNOS KO, corroborando os efeitos dependentes da compensação por nNOS nos KO. Dessa forma, para avaliar se a inibição da nNOS no CPFm seria capaz de atenuar o comportamento dos iNOS KO, inicialmente avaliamos se tal inibição no CPFm de animais WT com N-propil-L-arginina (NPLA), inibidor seletivo da nNOS (0,04; 0,1; 0,4 nmol/0,1 µL) facilitaria a aquisição da memória de extinção. Como tal efeito não foi evidenciado de forma significativa, os experimentos com os iNOS KO não foram realizados. Experimentos de imunohistoquímica e biomoleculares avaliaram a expressão de componentes do sistema nitrérgico e eCB, bem como os níveis de AEA e 2-AG no CPF de animais iNOS KO. Em condições basais, os iNOS KO apresentaram maior expressão de nNOS nas porções pré-límbica (PL) e infralímbica (IL) do CPFm e aumento dos níveis de 2-AG. Após a expressão do medo, houve aumento da expressão gênica de TRPV1 e NAPE-PLD no CPF dos iNOS KO, mas uma redução desses marcadores foi observada após a evocação da extinção. Finalmente, foi investigada a modulação do sistema eCB em animais iNOS KO popr meio da administração de URB597 (inibidor da FAAH), SB366791 (inibidor de TRPV1) ou AA-5HT (inibidor dual de FAAH/TRPV1) nas doses de 0,1, 0,3 e 1 mg/kg. Apenas a AA-5HT foi eficaz em promover a extinção da memória de medo e evocação da memória de extinção, sugerindo que apenas o bloqueio de CB1 ou TRPV1 não é suficiente para facilitar a evocação da extinção, sendo necessária a ativação de ambos os receptores. Esses achados ressaltam a complexidade da interação entre os sistemas nitrérgico e endocanabinoide na modulação do comportamento de medo, sugerindo que a combinação de abordagens farmacológicas pode ser necessária para melhorar a extinção da memória de medo em modelos de TEPT e outras condições relacionadas ao medo.