Investigação funcional inflamatória da linhagem microglial C20 em resposta a TNFα e ATP e do papel do receptor P2Y12

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Silva, Jean Bezerra
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Biologia microglial; Inflamação; Inflammation; Microglial biology; P2Y12 receptor; Purinergic signaling; Receptor P2Y12; Sinalização purinérgica; TNFα
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11042025-111111/

A microglia é o fagócito residente do sistema nervoso central (SNC) e o único tipo celular do sistema imune com acesso ao parênquima em homeostase. A microglia possui a capacidade de identificar diferentes tipos de estímulos danosos, processo conhecido como ativação microglial. TNFα é uma citocina produzida principalmente pela microglia no SNC, e uma das principais citocinas relacionadas às doenças neurodegenerativas. Dentre os efetores das funções microgliais, o sistema purinérgico é regulador da fagocitose, migração, comunicação neurônio:microglia e produção de citocinas. No SNC em homeostase, o receptor P2Y12 é exclusivamente expresso pela microglia, sua ativação está relacionada à indução de migração e novas evidências apontam que ele pode estar relacionado a ativação do inflamassoma, no entanto, esses resultados são exclusivos de modelos animais. Portanto, o objetivo desse trabalho é caracterizar a resposta inflamatória induzida por TNFα na linhagem microglial humana C20, e avaliar se o receptor P2Y12 possui papel central em sua biologia, em especial na liberação de citocinas e migração. Observamos que o estímulo inflamatório com TNFα, as células C20 não induz a produção de espécies reativas de oxigênio ou nitrogênio, o que a diferencia de linhagens microgliais murinas. Além disso, observamos que TNFα + 1 mM de ATP induz a redução da viabilidade celular a partir de 24h, no entanto, essa redução não é associada a morte inflamatória avaliada por LDH. Por outro lado, TNFα induz programação pró-inflamatória através da expressão de citocinas pró-inflamatórias,promove a redução da imunomarcação do receptor P2Y12 e alteração da morfologia. Adicionalmente, foi demonstrado que a ativação dos receptores P2Y12 das células C20 induz migração, enquanto o antagonismo foi capaz de inibir esse efeito. A inibição da atividade do receptor P2Y12 induziu aumento da produção de IL-6, mas não teve efeito na produção de IL-1β ou TNFα. Dessa forma, a linhagem microglial humana C20 apresenta capacidade efetora específica e similar ao que é observado em microglia de origem humana, sendo o receptor P2Y12 um dos pontos chave no controle da biologia microglial desse tipo celular.