Análise de adutos de DNA de compostos policíclicos aromáticos por eletroforese capilar com detecção por fluorescência induzida a laser

• Ano de defesa: 2001
• Autor(a) principal: Catai, Ana Paula Formenton
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: adutos de DNA; capillary electrophoresis; compostos policíclicos aromáticos; DNA; DNA adducts; eletroforese capilar; polycyclic aromatic compounds
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75132/tde-26092025-112510/

Vários compostos poluentes são encontrados na atmosfera, e dentre eles os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA), uma das classes de compostos que possuem propriedades carcinogênicas e/ou mutagênicas. Estes compostos são produzidos por diversas fontes de emissão, tanto naturais como antropogênicas, e podem entrar no organismo por ingestão, inalação ou absorção pela pele. O HPA mais estudado é o benzo[a]pireno, que quando dentro do organismo é metabolizado ao BPDE (7,8-diol 9,10-epóxido anti-7,8,9,10-tetrahidrobenzo[a]pireno), o qual pode se ligar às bases nitrogenadas do DNA (principalmente à guanina), formando um aduto. A presença de adutos pode induzir a erros de replicação do DNA e subsequente mutação genética e/ou formação de um tumor carcinogênico. Entretanto, 1 aduto para cada 1 x 106 - 1 x 109 nucleotídeos é formado, e portanto, a técnica analítica utilizada deve possuir alta sensibilidade. A eletroforese capilar (CE) é uma técnica que produz separações eficientes e, quando a detecção é feita por fluorescência induzida a laser (LIF), alta sensibilidade pode ser obtida. O objetivo do estudo foi o desenvolvimento de uma metodologia para avaliar o grau de exposição dos trabalhadores ambientalmente expostos aos HPA (cortadores de cana-de-açúcar e carvoeiros), utilizando o aduto dGMP-BPDE como um biomarcador. Neste trabalho, a CE-LIF foi utilizada para análise do aduto de desoxiguanosina monofosfato (dGMP) e BPDE, bem como para a determinação do limite de detecção e curva analítica. Após vários estudos sobre a síntese in vitro, desenvolveu-se uma metodologia para purificação e quantificação do padrão dGMP-BPDE, o qual foi utilizado em ensaios de recuperação. O limite de detecção encontrado foi de 2,5 x 10-9 mol·L-1, considerando-se uma relação sinal/ruído de 3. A recuperação do método, no entanto, não apresentou bons resultados devido à degradação do aduto durante o procedimento e, para determiná-la, mais estudos necessitam ser realizados. Nas análises das amostras de sangue dos trabalhadores ocupacionalmente expostos aos HPA, o aduto dGMP-BPDE não foi detectado, possivelmente devido às quantidades de adutos produzidas serem inferiores ao limite de detecção do método, ou seja, menores que a relação de 1 aduto formado em 1 x 107 nucleotídeos.