Biotecnologia aplicada à reprodução de peixes nativos da Volta Grande do Xingu: bases para o uso sustentável

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Alves, Andreoli Correia
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Espermatozoides; Fertilização in vitro; In vitro fertilization; Peacock bass; Qualidade espermática; Sperm; Sperm quality; Tucunaré
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-01082025-105718/

O desenvolvimento de protocolos de indução constitui etapa essencial para a padronização e maximização da eficiência na criação e aplicação de biotecnologias reprodutivas no controle de superpopulações de espécies introduzidas fora da sua área de endemismo. O presente trabalho foi conduzido com o objetivo de estabelecer procedimentos de indução hormonal, manutenção da qualidade espermática em sêmen refrigerado em curto prazo e a influência do desenvolvimento de protuberância pós-occipital sob qualidade espermática de machos de Cichla melaniae. Foram realizados quatro experimentos utilizando machos adultos de C. melaniae. O primeiro experimento foi a sexagem utilizando azul de metileno seguido da indução hormonal. No segundo experimento foi analisada a resposta à indução hormonal e para isso, foram formados três grupos distintos, sendo eles: machos induzidos hormonalmente com extrato de bruto de hipófise de carpa comum (EHC) diluído em NaCl 0,9% (Grupo induzido) nas doses de 0,5 e 5 mg/kg1, aplicados em intervalos de seis horas;(controle negativo) e grupo controle. No terceiro experimento, foram analisadas a motilidade, concentração e integridade da membrana espermática do sêmen diluído em Meio Essencial Mínimo Eagle (MEM) Dubelcco tampão fosfato salino (DPBS), Ringer, NaCl, Roswell Park Memorial Institute (RPMI) armazenado sob refrigeração a 2,5ºC por 72 horas. Por fim, no quarto experimento, foi analisada a relação entre protuberância pós-occipital associada à espermiação. Para isso, os machos foram submetidos à indução hormonal com extrato bruto de hipófise de carpa, nas concentrações de 0,5 mg, 5 mg e 10 mg/kg-1 aplicados em intervalos de 24 horas, ou seja, em 0 hora (fase 1: corresponde de 0 a 24 horas), 24 horas (fase 2: corresponde de 24 a 48 horas) e 48 horas (fase 3: corresponde de 48 a 72 horas), respectivamente. Os dados são apresentados como média ± erro padrão. Os machos (0,78 ± 0,02 kg, 69,95 ± 0,14 cm) induzidos com EHC apresentaram concentração espermática de 6,5 ± 1,0x 106, sendo maior quando comparado ao grupo controle negativo que apresentou concentração de 4,09 ± 1,1 x10 6 e ao grupo sem indução espermática (controle) com concentração de 5,16 ± 1,1 x 10 6 (P= 0,043). Após análise de osmolaridade, verificou-se que o sêmen de C. melaniae apresenta osmolaridade média de 299 ± 7,34 mOsmol/kg. Após 48 horas de armazenamento, os espermatozoides mantidos em diluidor MEM apresentaram integridade de membrana de 90,33 ± 1,00% (P = 0,002). Após 72 horas de refrigeração, os espermatozoides mantidos em MEM apresentaram maior percentual de integridade de membrana, sendo de 87,46 ± 1,18%. Por outro lado, os espermatozoides mantidos em diluidor de NaCl apresentaram integridade de membrana de 0,00%, indicando morte celular. Na fase 2, a protuberância pós-occipital foi mais evidente, o volume, a motilidade e a integridade da membrana espermática foram de 2,10 ± 0,25 μL, 78,56 ± 4,19%, 78,56 ± 4,19%, respectivamente. Por fim, na fase 3, a protuberância pós-occipital atingiu seu máximo desenvolvimento, motilidade e integridade da membrana espermática, vsl vcl e com volume de ejaculado de 99,12 ± 3,55%; 95,47 ± 4,19%; 30 μs-1 ; 57,00 μs-1 ; e 2,54 ± 0,23 μL, respectivamente. Com base em nossos resultados, o melhor extensor para selecionar é o MEM Eagle. Por outro lado, o NaCl teve a pior capacidade de manter a qualidade do esperma. Em situações de campo a Solução de Ringer seria o recomendado, devido a facilidade de preparo e armazenamento.