Investigação da neuroinflamação na interação do glioblastoma com seu microambiente tumoral em modelo in vitro

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Nóbrega, Ana Helena Larangeira
• Orientador(a): Bernardi, Andressa
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Fiocruz/IOC
• Link de acesso: https://arca.fiocruz.br/handle/icict/73786
• topic: Glioblastoma; Microambiente Tumoral; Doenças Neuroinflamatórias; Sistemas Microfisiológicos; Técnicas In Vitro

Glioblastoma é o tumor cerebral primário mais comum e agressivo em adultos, com a sobrevida minimamente prolongada pelo tratamento atual que inclui cirurgia, radioterapia e quimioterapia com temozolomida. O desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas é essencial devido às terapias ineficazes, à alta recorrência e, consequentemente, o mau prognóstico. Com o aumento do conhecimento de que os glioblastomas são tumores complexos, formados por células neoplásicas e não-neoplásicas, que podem contribuir individualmente para a formação, a progressão tumoral e a resposta ao tratamento, a compreensão do microambiente tumoral pode abrir novas oportunidades para o desenvolvimento de alternativas terapêuticas mais eficazes. O presente projeto tem por objetivo utilizar um modelo in vitro para investigar os mecanismos envolvidos na interação do glioblastoma com seu microambiente tumoral, com enfoque na neuroinflamação. Culturas organotípicas de hipocampo de ratos foram utilizadas como modelo de tecido não-tumoral, de modo que após o 14º dia de cultivo essas foram expostas às células da linhagem C6 de glioblastoma por 3h ou 6h. Um aumento significativo nos níveis das citocinas TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-10 foi observado no meio condicionado após 3h de interação entre C6 e culturas organotípicas. As análises por Western Blotting mostraram um aumento no imunoconteudo de Iba-1 nas fatias de hipocampo após interação com células glioblastoma por 3h, indicando ativação microglial na presença das células tumorais. Além disso, observou-se também uma astrogliose reativa após a interação das culturas. Essas alterações gliais foram confirmadas por imuno-histoquímica De maneira a confirmar o papel da microglia nesse cenário, foram realizados pré-tratamentos com 10 µM de minociclina (por 48h) ou de PLX3397 (por 7 dias), inibidor e depletor destas células, respectivamente. Interessantemente os níveis de todas as citocinas avaliadas foram significativamente reduzidos no meio condicionado após a utilização destas ferramentas farmacológicas. De forma semelhante, após o pré-tratamento com minociclina ou PLX3397, houve redução significativa do imunoconteudo de Iba-1 e de GFAP. Por outro lado, essas alterações gliais nas culturas organotípicas não interferiram de forma significativa nos níveis de fosforilação das proteínas AKT e ERK nas células tumorais. Interessantemente, observou-se um aumento significativo na expressão de CD133 e nestina, marcadores de células tronco-neurais, após a interação das células de glioblastoma com a cultura organotípica, indicando um aumento nos níveis de indiferenciação das células tumorais. Esse dado foi confirmado pela manutenção da baixa expressão da proteína GFAP nas células tumorais, o que indica a indiferenciação desta célula. Entretanto, não foram observadas alterações significativas nos parâmetros de migração e de proliferação celular. Tomados em conjunto, estes resultados sugerem que as células gliais, com destaque para a microglia, desempenham um papel importante na neuroinflamação presente no microambiente tumoral. E a interação entre culturas organotípicas de hipocampo e a linhagem C6 de glioblastoma é um modelo representativo que pode fornecer informações importantes sobre e a indiferenciação das células tumorais, bem como o microambiente e as interações moleculares entre essas células que impulsionam a neuroinflamação, podendo abrir novos caminhos no desenvolvimento de terapias inovadoras para esta patologia