Desenvolvimento e Uso de qPCR como Alternativa para o Diagnóstico e Controle da Esquistossomose em Áreas de Baixa Endemicidade para a Doença

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Pires, Eduardo Henrique Matos
• Orientador(a): Melo, Fábio Lopes de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://arca.fiocruz.br/handle/icict/66377
• topic: Esquistossomose -- parasitol; Esquistossomose -- diag; Schistosoma mansoni -- genet; DNA de protozoários; Diagnóstico molecular; Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real; Microscopia -- metodo; Sensibilidade e Especificidade; Estudo Comparativo; Esquistossomose; Schistosoma mansoni; DNA de protozoários; Diagnóstico Molecular; Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real; Microscopia; metodo; Sensibilidade e Especificidade; Estudo Comparativo

A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por trematódeos do gênero Schistosoma. No Brasil, país endêmico apenas para S. mansoni, é responsável pela manifestação hepatoesplênica da doença. A prevalência nacional da infecção diminui drasticamente devido a implementação de medidas de controle, resultando na manutenção de áreas de baixa endemicidade para a parasitose. Diante do novo cenário epidemiológico enfrentado, o exame parasitológico Kato-Katz (KK), recomendado para o diagnóstico da helmintíase, apresenta baixa sensibilidade em áreas de baixa endemicidade, o que dificulta o controle da doença. Diante disso, novas alternativas de diagnóstico estão sendo estudadas para o controle da enfermidade, dentre elas, o diagnóstico molecular. Portanto, o trabalho tem como objetivo principal avaliar o desempenho de uma nova qPCR (SmITS-qPCR) para o diagnóstico da doença em um território de baixa endemicidade. Para isso, um novo ensaio de qPCR (SmITS-qPCR) foi otimizado com concentrações conhecidas de DNA genômico de S. mansoni e aplicado em amostra de fezes coletadas em área de baixa endemicidade para a doença. Além da SmITS-qPCR, os métodos parasitológicos KK e Hoffman foram realizados como método de referência composto. A SmITS-qPCR apresentou sensibilidade analítica de 1fg/μL, sendo capaz de detectar menos de uma célula do helminto. Além disso, o sistema apresentou sensibilidade de 85,11% e especificidade 59,61%, com índice Kappa de 0,218. A taxa de positividade da infecção, pelos métodos de referência composto, foi de 13,28% (47/354), enquanto para a SmITS-qPCR foi de 46,61% (165/354). Além disso, o novo sistema foi capaz de classificar a carga parasitária com base no cycle threshold (Ct), como Leve ou Moderada. A SmITS-qPCR se revela uma ferramenta sensível e barata para uso como teste de triagem em populações que vivem em áreas de baixa endemicidade para doença, se associada a métodos de extração menos dispendiosos. Além disso, o novo sistema apresenta potencial em determinar a carga parasitária com base no Ct, fator importante na avaliação clínica e epidemiológica de regiões endêmicas(AU).