Avaliação da expressão dos genes STING, cGAS e interferon do tipo I (α e β) em culturas primárias de células do sistema nervoso central de camundongos, infectadas com o vírus Zika

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Souza, Mayque Paulo Miranda de
• Orientador(a): Cruz, Ana Cecília Ribeiro
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Instituto Evandro Chagas
• Link de acesso: https://patua.iec.gov.br/handle/iec/4210
• topic: Sistema Nervoso Central / virologia; Infecção por Zika virus; Expressão Gênica / genética; Cultura Primária de Células; Interferon-alfa / genética

O Vírus Zika (ZIKV) é um arbovírus de RNA fita simples polaridade positiva, que compreende um única Open Reading Frame (ORF), utilizada para originar todas as proteínas virais. Os receptores de reconhecimento de padrão (PRRs) participam no processo de identificação de estruturas compartilhadas e conservadas de patógenos invasores. Dentre os PRRs, a via cGAS/STING é conhecida pela capacidade de detectar DNA citosólico, além de estar envolvida em infecções por alguns vírus de RNA, como o ZIKV, que dependendo do hospedeiro, pode se utilizar de diversos mecanismos para tentar contornar a resposta imune. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão de genes envolvidos na via cGAS/STING, correlacionando com a cinética do ZIKV em culturas primárias de micróglias e neurônios de camundongos imunocompetentes. A susceptibilidade e permissividade das células foi confirmada mediante o ensaio de imunofluorescência indireta (IFI). Titulação em placa do sobrenadante de micróglias e neurônios foi realizado, e posteriormente, realizou-se extração, quantificação e normalização do RNA total para determinar a cinética viral por RT-qPCR com sonda TaqMan, para a expressão dos genes alvos, foi realizada RT-qPCR com SYBR Green. Por fim, a clivagem da proteína STING murina foi avaliada pelo ensaio de Western Blotting. O perfil de titulação em placa do sobrenadante determinado para micróglias e neurônios foi semelhante, com maiores títulos de unidades formadoras de placas (PFUs) em 1, 2, 3 e 4 dpi, respectivamente, para ambos os tipos celulares. A cinética do ZIKV foi semelhante em ambas células, com os maiores títulos virais encontrados no 2, 3, 1 e 4 dpi, respectivamente, enquanto que, o perfil de expressão dos genes cGAS, STING, INF-α e INF-β, foi bastante diferente nestes tipos celulares, incluindo supressão de alguns deles, como observado no caso do gene cGAS de neurônios, para todos os dias pós infecção investigados. Não foi constatada a clivagem da proteína STING de camundongos nas análises do perfil proteico. Em conclusão, a cinética do ZIKV foi semelhante em micróglias e neurônios de camundongos, porém, o perfil de expressão dos genes avaliados foi variado, o que indica que mesmo células de um mesmo hospedeiro e tecido, podem se comportar de maneira particular quando infectadas por este vírus. Sendo assim, a fim de obter uma melhor compreensão da dinâmica relação vírus-hospedeiro, mais estudos utilizando diferentes tipos celulares de um mesmo hospedeiro, bem como, comparando diferentes espécies, são necessários para ampliar o conhecimento acerca da patogênese do ZIKV, contribuindo assim, na orientação para o desenvolvimento de medicamentos e vacinas contra esse agente patogênico.