Potencial antibiofilme e efeito sinérgico do óleo essencial de Allium sativum e seus compostos majoritários frente a isolados clínicos de Candida albicans

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2020
Autor(a) principal: Pereira, Rafael
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso embargado
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=97628
Resumo: <div style="text-align: justify;"><span style="font-size: 10pt;">O aumento de infecções microbianas juntamente com a resistência que estes agentes têm desenvolvido aos antimicrobianos convencionais tem levado a uma busca constante por alternativas terapêuticas eficazes, que possam oferecer melhores opções de tratamento aos doentes. O alho (Allium sativum) é uma especiaria herbácea anual aromática e uma das mais antigas ervas autenticadas e mais importantes que têm sido usadas desde os tempos antigos como medicina tradicional. É considerada a segunda espécie de Allium amplamente utilizada, assim como a cebola (A. cepa L.), que é usada como remédio contra várias doenças, como resfriado, gripe, picada de cobra e hipertensão. Desta forma, o objetivo do trabalho foi isolar cepas de Candida ssp. de pacientes e avaliar o potencial antifúngico, antibiofilme e efeito sinérgico do óleo essencial de A. sativum e seus constituintes majoritários dissulfeto de dialila e trissulfeto de dialila frente a isolados clínicos de Candida albicans. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram determinadas pelo método de microdiluição em caldo. O sinergismo foi avaliado pelo método de checkerboard com a combinação das amostras com as drogas anfotericina B e fluconazol. Já a formação do biofilme foi avaliada através da quantificação de biomassa pelo método de coloração com cristal de violeta (CV). Para o estudo de docagem molecular, foram realizadas interações intermoleculares entre as enzimas Cyp51 e Als3 e os ligantes utilizando o código AutoDock Vina. As espécies de leveduras tiveram o seu crescimento planctônico completamente inibido pelo óleo essencial de A. sativum e seus constituintes majoritários nas concentrações que variaram entre 2,5 a 0,625 mg/mL, assim como o óleo essencial apresentou efeito sinérgico com anfotericina B para as cepas de C. albicans LABMIC 0101, LABMIC 0102 e LABMIC 0104, reduzindo os valores de CIM de 1250 para 78µg/mL. Para as cepas C. albicans LABMIC 0105 e ATCC 90028, a redução dos valores do CIM foram 625 para 39 µg/mL e de 625 para 156 µg/mL respectivamente. O trissulfeto de dialila presentou efeito sinérgico com anfotericina B para as C. albicans LABMIC 0104, LABMIC 0105 e ATCC 90028 reduzindo os valores de CIM de 2.500 para 625 µg/mL. Em relação ao fluconazol, o constituinte apresentou efeito sinérgico para C. albicans LABMIC 0104 e ATCC 90028 com os valores de CIM de 2.500 para 625 µg/mL e efeito aditivo para C. albicans LABMIC 0105 de 2.500 para 1250 µg/mL. Em relação aos ensaios antibiofilmes, as amostras induziram uma redução na biomassa para todas as leveduras testadas entre 20 a 100%. Os ligantes dissulfeto de dialila, trissulfeto de dialila e fluconazol formaram complexos com as enzimas Cyp51 e Als3 com energias de ligações variado de -3.4 a -6.9. Portanto, os resultados demonstraram que o óleo essencial e dissulfeto de dialila e trissulfeto de dialila, podem ser considerados como possíveis agentes antifúngicos, sugerindo assim o uso dessas amostras no tratamento de infecções associadas a C. albicans. Palavras-chaves: Allium sativum. Candidíase. Antibiofilme. Antifúngico.</span></div>
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Desta forma, o objetivo do trabalho foi isolar cepas de Candida ssp. de pacientes e avaliar o potencial antifúngico, antibiofilme e efeito sinérgico do óleo essencial de A. sativum e seus constituintes majoritários dissulfeto de dialila e trissulfeto de dialila frente a isolados clínicos de Candida albicans. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram determinadas pelo método de microdiluição em caldo. O sinergismo foi avaliado pelo método de checkerboard com a combinação das amostras com as drogas anfotericina B e fluconazol. Já a formação do biofilme foi avaliada através da quantificação de biomassa pelo método de coloração com cristal de violeta (CV). Para o estudo de docagem molecular, foram realizadas interações intermoleculares entre as enzimas Cyp51 e Als3 e os ligantes utilizando o código AutoDock Vina. As espécies de leveduras tiveram o seu crescimento planctônico completamente inibido pelo óleo essencial de A. sativum e seus constituintes majoritários nas concentrações que variaram entre 2,5 a 0,625 mg/mL, assim como o óleo essencial apresentou efeito sinérgico com anfotericina B para as cepas de C. albicans LABMIC 0101, LABMIC 0102 e LABMIC 0104, reduzindo os valores de CIM de 1250 para 78µg/mL. Para as cepas C. albicans LABMIC 0105 e ATCC 90028, a redução dos valores do CIM foram 625 para 39 µg/mL e de 625 para 156 µg/mL respectivamente. O trissulfeto de dialila presentou efeito sinérgico com anfotericina B para as C. albicans LABMIC 0104, LABMIC 0105 e ATCC 90028 reduzindo os valores de CIM de 2.500 para 625 µg/mL. Em relação ao fluconazol, o constituinte apresentou efeito sinérgico para C. albicans LABMIC 0104 e ATCC 90028 com os valores de CIM de 2.500 para 625 µg/mL e efeito aditivo para C. albicans LABMIC 0105 de 2.500 para 1250 µg/mL. Em relação aos ensaios antibiofilmes, as amostras induziram uma redução na biomassa para todas as leveduras testadas entre 20 a 100%. Os ligantes dissulfeto de dialila, trissulfeto de dialila e fluconazol formaram complexos com as enzimas Cyp51 e Als3 com energias de ligações variado de -3.4 a -6.9. Portanto, os resultados demonstraram que o óleo essencial e dissulfeto de dialila e trissulfeto de dialila, podem ser considerados como possíveis agentes antifúngicos, sugerindo assim o uso dessas amostras no tratamento de infecções associadas a C. albicans. Palavras-chaves: Allium sativum. Candidíase. Antibiofilme. Antifúngico.</span></div><div style="text-align: justify;"><span style="font-size: 10pt;">The increase in microbial infections along with the resistance that these agents have developed to conventional antimicrobials has led to a constant search for effective therapeutic alternatives that can offer better treatment options to patients. Garlic (Allium sativum) is an annual aromatic herb spice and one of the oldest authenticated and most important herbs that has been used since ancient times as traditional medicine. It is considered the second widely used species of Allium, as well as the onion (A. cepa L.), which is used as a medicine against various diseases, such as cold, flu, snakebite and hypertension. Thus, the objective of the work was to isolate strains of Candida ssp. of patients and evaluate the antifungal potential, antibiofilm and synergistic effect of the essential oil of A. sativum and its major constituents of diallyl disulfide and diallyl disulfide against clinical isolates of Candida albicans. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the Minimum Fungicidal Concentration (CFM) were determined by the broth microdilution method. Synergism was assessed by the checkerboard method with the combination of the samples with the drugs amphotericin B and fluconazole. The formation of the biofilm, on the other hand, was evaluated through the quantification of biomass using the violet crystal (CV) staining method. For the study of molecular docking, intermolecular interactions were carried out between the enzymes Cyp51 and Als3 and the ligands using the AutoDock Vina code. Yeast species had their planktonic growth completely inhibited by the essential oil of A. sativum and its major constituents in concentrations ranging from 2.5 to 0.625 mg/mL, just as the essential oil showed a synergistic effect with amphotericin B for the strains of C. albicans LABMIC 0101, LABMIC 0102 and LABMIC 0104, reducing MIC values from 1.250 to 78µg/mL. For strains C. albicans LABMIC 0105 and ATCC 90028, the reduction in MIC values was 625 to 39 µg/mL and from 625 to 156 µg/mL, respectively. The diallyl trisulfide showed a synergistic effect with amphotericin B for C. albicans LABMIC 0104, LABMIC 0105 and ATCC 90028 reducing MIC values from 2.500 to 625 µg/mL. Regarding fluconazole, the constituent showed a synergistic effect for C. albicans LABMIC 0104 and ATCC 90028 with MIC values from 2.500 to 625 µg/mL and additive effect for C. albicans LABMIC 0105 from 2.500 to 1.250 µg/mL . Regarding the antibiofilm tests, the samples induced a reduction in biomass for all yeasts tested between 20 and 100%. The diallyl disulfide, diallyl trisulfide and fluconazole ligands formed complexes with the enzymes Cyp51 and Als3 with binding energies ranging from -3.4 to -6.9. Therefore, the results demonstrated that the essential oil and diallyl disulfide and diallyl trisulfide can be considered as possible antifungal agents, thus suggesting the use of these samples in the treatment of infections associated with C. albicans. Keywords: Allium sativum. Candidiasis. Antibiofilm. Antifungal.</span></div>Universidade Estadual do CearáRaquel Oliveira dos Santos FontenellePereira, Rafael2020-12-03T14:45:32Z2020-12-18T00:00:00Z2020info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfhttps://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=97628info:eu-repo/semantics/embargoedAccessporreponame:Repositório Institucional da UECEinstname:Universidade Estadual do Cearáinstacron:UECE2020-12-03T14:45:32Zoai:uece.br:97628Repositório InstitucionalPUBhttps://siduece.uece.br/siduece/api/oai/requestopendoar:2020-12-03T14:45:32Repositório Institucional da UECE - Universidade Estadual do Cearáfalse
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