Efeito de diferentes concentrações de FSH recombinante sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isolados
| Ano de defesa: | 2009 |
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| Tipo de documento: | Dissertação |
| Tipo de acesso: | Acesso aberto |
| Idioma: | por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Estadual do Ceará
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| Programa de Pós-Graduação: |
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| Palavras-chave em Português: | |
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Resumo: | <div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O desenvolvimento de um sistema de cultivo in vitro capaz de manter a viabilidade e promover o </span></font><span style="font-size: 13.3333px;">completo crescimento de folículos pré-antrais (folículos pré-antrais) é de fundamental </span><span style="font-size: 13.3333px;">importância para o fornecimento de milhares de oócitos viáveis, aptos a serem fertilizados, </span><span style="font-size: 13.3333px;">visando o aumento na produção de embriões. Desta forma, este trabalho teve como objetivo </span><span style="font-size: 13.3333px;">avaliar o efeito do hormônio folículo estimulante recombinante (FSHr) sobre o desenvolvimento </span><span style="font-size: 13.3333px;">in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isolados. Para tanto, ovários de cabras e ovelhas </span><span style="font-size: 13.3333px;">sem raça definida foram coletados em abatedouro local e transportados ao laboratório por até </span><span style="font-size: 13.3333px;">uma hora em Meio Essencial Mínimo (MEM) a 4°C contendo HEPES e antibióticos. Os folículos </span><span style="font-size: 13.3333px;">pré-antrais foram isolados por microdissecção com auxílio de agulhas de 26 G sob </span><span style="font-size: 13.3333px;">estereomicroscópio. Em seguida, os folículos isolados foram cultivados em gotas de 25 μL de α- </span><span style="font-size: 13.3333px;">MEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 1% de insulina- ransferrina-selênio </span><span style="font-size: 13.3333px;">(ITS),1% de antibióticos e 50 μg/mL de ácido ascórbico, na ausência (controle) ou presença de </span><span style="font-size: 13.3333px;">FSHr (100 ou 1000 ng/mL), a 39 °C com 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo foram avaliados a </span><span style="font-size: 13.3333px;">morfologia, o crescimento folicular e a formação de antro. Foi observado que, na espécie caprina, </span><span style="font-size: 13.3333px;">o cultivo com FSHr, em ambas concentrações testadas, apresentou percentuais de folículos </span><span style="font-size: 13.3333px;">morfologicamente normais semelhantes ao controle até o 12º dia de cultivo (P>0,05), sendo </span><span style="font-size: 13.3333px;">observada uma redução deste parâmetro no 18º dia (P<0,05) somente no tratamento com 1000 </span><span style="font-size: 13.3333px;">ng/mL de FSRr. Na espécie ovina, o percentual de folículos morfologicamente normais foi </span><span style="font-size: 13.3333px;">semelhante em todos os tratamentos (P>0,05). Com relação ao desenvolvimento folicular, em </span><span style="font-size: 13.3333px;">caprinos, a adição de FSHr, em ambas concentrações, aumentou significativamente a taxa de </span><span style="font-size: 13.3333px;">crescimento em relação ao controle (P<0,05). Entretanto, na espécie ovina, este aumento só foi </span><span style="font-size: 13.3333px;">observado no grupo tratado com FSHr na concentração de 1000 ng/mL. No que se refere à </span><span style="font-size: 13.3333px;">formação de antro, em ambas as espécies, não foi observada diferença significativa entre os </span><span style="font-size: 13.3333px;">tratamentos com FSHr e o grupo controle. Quanto à análise da configuração da cromatina, </span><span style="font-size: 13.3333px;">observou-se que todos os oócitos permaneceram em estádio de vesícula germinativa. Assim, </span><span style="font-size: 13.3333px;">pôde-se concluir que folículos pré-antrais caprinos e ovinos são capazes de manter a </span><span style="font-size: 13.3333px;">sobrevivência e o crescimento in vitro até o estádio antral na ausência de FSH. Contudo, este </span><span style="font-size: 13.3333px;">hormônio teve um papel importante no aumento da taxa de crescimento folicular em ambas as </span><font face="Arial, Verdana" style="font-size: 10pt;"><span style="font-size: 13.3333px;">espécies. </span></font><span style="font-size: 10pt;">Palavras-chave: Hormônio folículo estimulante. Cultivo in vitro. Cabras. Ovelhas. Folículo pré-antral. </span><span style="font-size: 10pt;">Oócito.</span></div> |
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Efeito de diferentes concentrações de FSH recombinante sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isoladosCabra Ciências veterinárias Foliculo Pre-Antral Hormonio Foliculo Estimulante Ovelhas<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O desenvolvimento de um sistema de cultivo in vitro capaz de manter a viabilidade e promover o </span></font><span style="font-size: 13.3333px;">completo crescimento de folículos pré-antrais (folículos pré-antrais) é de fundamental </span><span style="font-size: 13.3333px;">importância para o fornecimento de milhares de oócitos viáveis, aptos a serem fertilizados, </span><span style="font-size: 13.3333px;">visando o aumento na produção de embriões. Desta forma, este trabalho teve como objetivo </span><span style="font-size: 13.3333px;">avaliar o efeito do hormônio folículo estimulante recombinante (FSHr) sobre o desenvolvimento </span><span style="font-size: 13.3333px;">in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isolados. Para tanto, ovários de cabras e ovelhas </span><span style="font-size: 13.3333px;">sem raça definida foram coletados em abatedouro local e transportados ao laboratório por até </span><span style="font-size: 13.3333px;">uma hora em Meio Essencial Mínimo (MEM) a 4°C contendo HEPES e antibióticos. Os folículos </span><span style="font-size: 13.3333px;">pré-antrais foram isolados por microdissecção com auxílio de agulhas de 26 G sob </span><span style="font-size: 13.3333px;">estereomicroscópio. Em seguida, os folículos isolados foram cultivados em gotas de 25 μL de α- </span><span style="font-size: 13.3333px;">MEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 1% de insulina- ransferrina-selênio </span><span style="font-size: 13.3333px;">(ITS),1% de antibióticos e 50 μg/mL de ácido ascórbico, na ausência (controle) ou presença de </span><span style="font-size: 13.3333px;">FSHr (100 ou 1000 ng/mL), a 39 °C com 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo foram avaliados a </span><span style="font-size: 13.3333px;">morfologia, o crescimento folicular e a formação de antro. Foi observado que, na espécie caprina, </span><span style="font-size: 13.3333px;">o cultivo com FSHr, em ambas concentrações testadas, apresentou percentuais de folículos </span><span style="font-size: 13.3333px;">morfologicamente normais semelhantes ao controle até o 12º dia de cultivo (P>0,05), sendo </span><span style="font-size: 13.3333px;">observada uma redução deste parâmetro no 18º dia (P<0,05) somente no tratamento com 1000 </span><span style="font-size: 13.3333px;">ng/mL de FSRr. Na espécie ovina, o percentual de folículos morfologicamente normais foi </span><span style="font-size: 13.3333px;">semelhante em todos os tratamentos (P>0,05). Com relação ao desenvolvimento folicular, em </span><span style="font-size: 13.3333px;">caprinos, a adição de FSHr, em ambas concentrações, aumentou significativamente a taxa de </span><span style="font-size: 13.3333px;">crescimento em relação ao controle (P<0,05). Entretanto, na espécie ovina, este aumento só foi </span><span style="font-size: 13.3333px;">observado no grupo tratado com FSHr na concentração de 1000 ng/mL. No que se refere à </span><span style="font-size: 13.3333px;">formação de antro, em ambas as espécies, não foi observada diferença significativa entre os </span><span style="font-size: 13.3333px;">tratamentos com FSHr e o grupo controle. Quanto à análise da configuração da cromatina, </span><span style="font-size: 13.3333px;">observou-se que todos os oócitos permaneceram em estádio de vesícula germinativa. Assim, </span><span style="font-size: 13.3333px;">pôde-se concluir que folículos pré-antrais caprinos e ovinos são capazes de manter a </span><span style="font-size: 13.3333px;">sobrevivência e o crescimento in vitro até o estádio antral na ausência de FSH. Contudo, este </span><span style="font-size: 13.3333px;">hormônio teve um papel importante no aumento da taxa de crescimento folicular em ambas as </span><font face="Arial, Verdana" style="font-size: 10pt;"><span style="font-size: 13.3333px;">espécies. </span></font><span style="font-size: 10pt;">Palavras-chave: Hormônio folículo estimulante. Cultivo in vitro. Cabras. Ovelhas. Folículo pré-antral. </span><span style="font-size: 10pt;">Oócito.</span></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">The development of an in vitro culture system able to maintaining the viability and promote the </span></font><span style="font-size: 13.3333px;">full growth of preantral follicles is very important for supply thousands of viable oocytes, ready </span><span style="font-size: 13.3333px;">to be fertilized, in order to increase the production of embryos. The aim of this work was to </span><span style="font-size: 13.3333px;">evaluate the effects of recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) on the in vitro </span><span style="font-size: 13.3333px;">development of isolated caprine and ovine preantral follicles. For this purpose, ovaries were </span><span style="font-size: 13.3333px;">collected from mixed-breed goats and ewes at a local slaughterhouse and transported to the </span><span style="font-size: 13.3333px;">laboratory in HEPES-buffered Minimum Essential Medium (MEM) with antibiotics at 4ºC within </span><span style="font-size: 13.3333px;">1h. Preantral follicles were isolated under a stereomicroscope using 26 G needles. Afterwards, </span><span style="font-size: 13.3333px;">follicles were individually cultured in 100 μL drops containing α-MEM supplemented with 10% </span><span style="font-size: 13.3333px;">fetal calf serum (FCS), 1% insulin- ransferrin-selenium (ITS), 1% antibiotics and 50 μg/mL </span><span style="font-size: 13.3333px;">ascorbic acid, without (control) or with rFSH at 100 or 1000 ng/mL. The in vitro culture was </span><span style="font-size: 13.3333px;">carried out at 39°C in an humidified incubator with 5% CO2 in air. Follicular morphology, </span><span style="font-size: 13.3333px;">growth and antral cavity formation were assessed throughout the culture. The results showed that </span><span style="font-size: 13.3333px;">addition of rFSH to the medium in both tested concentrations had no effect on the percentages of </span><span style="font-size: 13.3333px;">caprine morphologically normal follicles until day 12 of culture as compared with the control </span><span style="font-size: 13.3333px;">(P>0.05), but a decrease was observed on day 18 when the hormone (P<0.05) was used at </span><span style="font-size: 13.3333px;">concentration of 1000 ng/mL. Regarding ovine studies, percentages of normal follicles were </span><span style="font-size: 13.3333px;">similar in all treatments. Growth rates were increased in caprine follicles by use of rFSH in both </span><span style="font-size: 13.3333px;">concentrations in comparison to the control (P<0.05). In ovine follicles, such effect was observed </span><span style="font-size: 13.3333px;">only when rFSH was used at 1000 ng/ml. In regard to antral cavity formation, no diference </span><span style="font-size: 13.3333px;">among treatments was observed for both species. The analysis of chromatin configuration </span><span style="font-size: 13.3333px;">revealed that all oocytes remained at the germinal vesicle stage. In conclusion, caprine and ovine </span><span style="font-size: 13.3333px;">preantral follicles are capable to survive and develop to the antral stage in vitro without FSH. </span><span style="font-size: 13.3333px;">However, this hormone is important for increasing follicular growth rates in both species. </span><span style="font-size: 13.3333px;">Keywords: follicle stimulating hormone, in vitro culture, goats, ewes, preantral follicle, oocyte.</span></div>Universidade Estadual do CearáJose Ricardo de FigueiredoRodrigues, Giovanna Quintino2009-09-28T00:00:00Z2009info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=54827info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UECEinstname:Universidade Estadual do Cearáinstacron:UECE2009-09-28T00:00:00Zoai:uece.br:54827Repositório InstitucionalPUBhttps://siduece.uece.br/siduece/api/oai/requestopendoar:2009-09-28T00:00Repositório Institucional da UECE - Universidade Estadual do Cearáfalse |
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<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O desenvolvimento de um sistema de cultivo in vitro capaz de manter a viabilidade e promover o </span></font><span style="font-size: 13.3333px;">completo crescimento de folículos pré-antrais (folículos pré-antrais) é de fundamental </span><span style="font-size: 13.3333px;">importância para o fornecimento de milhares de oócitos viáveis, aptos a serem fertilizados, </span><span style="font-size: 13.3333px;">visando o aumento na produção de embriões. Desta forma, este trabalho teve como objetivo </span><span style="font-size: 13.3333px;">avaliar o efeito do hormônio folículo estimulante recombinante (FSHr) sobre o desenvolvimento </span><span style="font-size: 13.3333px;">in vitro de folículos pré-antrais caprinos e ovinos isolados. Para tanto, ovários de cabras e ovelhas </span><span style="font-size: 13.3333px;">sem raça definida foram coletados em abatedouro local e transportados ao laboratório por até </span><span style="font-size: 13.3333px;">uma hora em Meio Essencial Mínimo (MEM) a 4°C contendo HEPES e antibióticos. Os folículos </span><span style="font-size: 13.3333px;">pré-antrais foram isolados por microdissecção com auxílio de agulhas de 26 G sob </span><span style="font-size: 13.3333px;">estereomicroscópio. Em seguida, os folículos isolados foram cultivados em gotas de 25 μL de α- </span><span style="font-size: 13.3333px;">MEM suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), 1% de insulina- ransferrina-selênio </span><span style="font-size: 13.3333px;">(ITS),1% de antibióticos e 50 μg/mL de ácido ascórbico, na ausência (controle) ou presença de </span><span style="font-size: 13.3333px;">FSHr (100 ou 1000 ng/mL), a 39 °C com 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo foram avaliados a </span><span style="font-size: 13.3333px;">morfologia, o crescimento folicular e a formação de antro. Foi observado que, na espécie caprina, </span><span style="font-size: 13.3333px;">o cultivo com FSHr, em ambas concentrações testadas, apresentou percentuais de folículos </span><span style="font-size: 13.3333px;">morfologicamente normais semelhantes ao controle até o 12º dia de cultivo (P>0,05), sendo </span><span style="font-size: 13.3333px;">observada uma redução deste parâmetro no 18º dia (P<0,05) somente no tratamento com 1000 </span><span style="font-size: 13.3333px;">ng/mL de FSRr. Na espécie ovina, o percentual de folículos morfologicamente normais foi </span><span style="font-size: 13.3333px;">semelhante em todos os tratamentos (P>0,05). Com relação ao desenvolvimento folicular, em </span><span style="font-size: 13.3333px;">caprinos, a adição de FSHr, em ambas concentrações, aumentou significativamente a taxa de </span><span style="font-size: 13.3333px;">crescimento em relação ao controle (P<0,05). Entretanto, na espécie ovina, este aumento só foi </span><span style="font-size: 13.3333px;">observado no grupo tratado com FSHr na concentração de 1000 ng/mL. No que se refere à </span><span style="font-size: 13.3333px;">formação de antro, em ambas as espécies, não foi observada diferença significativa entre os </span><span style="font-size: 13.3333px;">tratamentos com FSHr e o grupo controle. Quanto à análise da configuração da cromatina, </span><span style="font-size: 13.3333px;">observou-se que todos os oócitos permaneceram em estádio de vesícula germinativa. Assim, </span><span style="font-size: 13.3333px;">pôde-se concluir que folículos pré-antrais caprinos e ovinos são capazes de manter a </span><span style="font-size: 13.3333px;">sobrevivência e o crescimento in vitro até o estádio antral na ausência de FSH. Contudo, este </span><span style="font-size: 13.3333px;">hormônio teve um papel importante no aumento da taxa de crescimento folicular em ambas as </span><font face="Arial, Verdana" style="font-size: 10pt;"><span style="font-size: 13.3333px;">espécies. </span></font><span style="font-size: 10pt;">Palavras-chave: Hormônio folículo estimulante. Cultivo in vitro. Cabras. Ovelhas. Folículo pré-antral. </span><span style="font-size: 10pt;">Oócito.</span></div> |
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