Avaliação da capacidade antioxidante do anetol na maturação in vitro de oócitos ovinos
| Ano de defesa: | 2023 |
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| Tipo de documento: | Dissertação |
| Tipo de acesso: | Acesso aberto |
| Idioma: | por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Estadual do Ceará
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
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| Link de acesso: | https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=109559 |
Resumo: | A maturação oocitária in vitro (MIV) tem sido amplamente utilizada na maioria das espécies de mamíferos, incluindo a espécie ovina, com o intuito de otimizar a reserva ovariana e potencializar técnicas como a fertilização (FIV) e a produção in vitro de embriões (PIV). Entretanto, embora a utilização dessas técnicas deveriam mimetizar as condições ovarianas, sabe-se que a manipulacao dos gametas e sua exposição ao oxigênio, luminosidade entre outros fatores, pode contribuir para o um possível estresse oxidativo, levando à prejuízos na competência e desenvolvimento do oócito. Nesse contexto, a utilização de substâncias naturais com atividade biológica antioxidante seria de grande importância na prevenção e/ou controle do desbalanço entre a produção e consumo de espécies reativas de oxigênio (EROs). Entre os principais antioxidantes existentes, destaca-se o anetol. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo verificar os efeitos de diferentes concentrações do anetol (AN) adicionadas ao meio de MIV sobre as taxas de extrusão do primeiro corpúsculo polar, bem como sobre os níveis dos conteúdos de tiol e das atividades das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) no meio extracelular, além da mensuração da capacidade antioxidante total do anetol. Foram utilizados ovários ovinos (n=120), os quais foram coletados em abatedouro local e transportados até o laboratório em solucao salina adicionada de antibióticos à 32o C. No laboratório, os ovários foram fatiados, utilizando a técnica de slicing, para a coleta dos complexos cúmulus-oócito (CCOs). Apenas CCOs que apresentavam oócitos claros e com citoplasma homogêneo, circundados por duas ou mais camadas compactas de células do cúmulos e zona pelúcida intacta foram selecionados para o experimento. Um total de 200 CCOs foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: meio de MIV na ausência (tratamento controle, n=50) ou na presença de anetol nas concentrações de 30 μg/mL (AN30, n=50), 300 μg/mL (AN300, n=50) e 2000 μg/mL (AN2000, n=50). Os resultados demonstraram uma porcentagem de oócitos em metáfase II significativamente superior no tratamento AN 300 quando comparado ao tratamento AN2000, embora sem diferencas com o tratamento controle. A atividade da enzima SOD foi significativamnete reduzida no tratamento AN2000 quando comparado ao tratamento controle. Entretanto, a atividade da enzima CAT, bem como o conteúdo de tiol não diferiram entre os tratamentos. Finalmente, a capacidade antioxidante total avaliada pelos métodos de DPPH e ABTS demonstatam que os tratamentos todas as concentraçoes de anetol utilizadas foram sigificativamente superiores quando comparadas ao grupo controle. Com base nestes resultados, pode-se concluir que a suplementação com anetol durante a MIV de oócitos na espécie ovina não apresentou potencial antioxidante ou atuou na progressão meiótica. Contudo, em função do tratamento AN 300 ter aumentado a taxa de MII quando comparado ao tratamento AN 2000, propõe-se a utilização da concentração de AN 300 µg/mL durante o cultivo in vitro de células reprodutivas. |
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Avaliação da capacidade antioxidante do anetol na maturação in vitro de oócitos ovinosA maturação oocitária in vitro (MIV) tem sido amplamente utilizada na maioria das espécies de mamíferos, incluindo a espécie ovina, com o intuito de otimizar a reserva ovariana e potencializar técnicas como a fertilização (FIV) e a produção in vitro de embriões (PIV). Entretanto, embora a utilização dessas técnicas deveriam mimetizar as condições ovarianas, sabe-se que a manipulacao dos gametas e sua exposição ao oxigênio, luminosidade entre outros fatores, pode contribuir para o um possível estresse oxidativo, levando à prejuízos na competência e desenvolvimento do oócito. Nesse contexto, a utilização de substâncias naturais com atividade biológica antioxidante seria de grande importância na prevenção e/ou controle do desbalanço entre a produção e consumo de espécies reativas de oxigênio (EROs). Entre os principais antioxidantes existentes, destaca-se o anetol. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo verificar os efeitos de diferentes concentrações do anetol (AN) adicionadas ao meio de MIV sobre as taxas de extrusão do primeiro corpúsculo polar, bem como sobre os níveis dos conteúdos de tiol e das atividades das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) no meio extracelular, além da mensuração da capacidade antioxidante total do anetol. Foram utilizados ovários ovinos (n=120), os quais foram coletados em abatedouro local e transportados até o laboratório em solucao salina adicionada de antibióticos à 32o C. No laboratório, os ovários foram fatiados, utilizando a técnica de slicing, para a coleta dos complexos cúmulus-oócito (CCOs). Apenas CCOs que apresentavam oócitos claros e com citoplasma homogêneo, circundados por duas ou mais camadas compactas de células do cúmulos e zona pelúcida intacta foram selecionados para o experimento. Um total de 200 CCOs foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: meio de MIV na ausência (tratamento controle, n=50) ou na presença de anetol nas concentrações de 30 μg/mL (AN30, n=50), 300 μg/mL (AN300, n=50) e 2000 μg/mL (AN2000, n=50). Os resultados demonstraram uma porcentagem de oócitos em metáfase II significativamente superior no tratamento AN 300 quando comparado ao tratamento AN2000, embora sem diferencas com o tratamento controle. A atividade da enzima SOD foi significativamnete reduzida no tratamento AN2000 quando comparado ao tratamento controle. Entretanto, a atividade da enzima CAT, bem como o conteúdo de tiol não diferiram entre os tratamentos. Finalmente, a capacidade antioxidante total avaliada pelos métodos de DPPH e ABTS demonstatam que os tratamentos todas as concentraçoes de anetol utilizadas foram sigificativamente superiores quando comparadas ao grupo controle. Com base nestes resultados, pode-se concluir que a suplementação com anetol durante a MIV de oócitos na espécie ovina não apresentou potencial antioxidante ou atuou na progressão meiótica. Contudo, em função do tratamento AN 300 ter aumentado a taxa de MII quando comparado ao tratamento AN 2000, propõe-se a utilização da concentração de AN 300 µg/mL durante o cultivo in vitro de células reprodutivas.In vitro oocyte maturation (IVM) has been widely used in most mammalian species, including sheep, with the aim of optimizing the ovarian reserve and enhancing techniques such as fertilization (IVF) and in vitro embryo production (IVP). ). However, although the use of these techniques should mimic the ovarian conditions, it is known that the manipulation of the gametes and their exposure to oxygen, luminosity, among other factors, can contribute to a possible oxidative stress, leading to losses in the competence and development of the oocyte. . In this context, the use of natural substances with antioxidant biological activity would be of great importance in preventing and/or controlling the imbalance between the production and consumption of reactive oxygen species (ROS). Among the main existing antioxidants, anethole stands out. Thus, the present study aimed to verify the effects of different concentrations of anethole (AN) added to the IVM medium on the rates of extrusion of the first polar body, as well as on the levels of thiol content and activities of antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) in the extracellular medium, in addition to measuring the total antioxidant capacity of anethole. Ovine ovaries (n=120) were used, which were collected at a local slaughterhouse and transported to the laboratory in saline solution added with antibiotics at 32o C. In the laboratory, the ovaries were sliced, using the slicing technique, to collect the ovaries. Cumulus-oocyte complexes (COCs).Only COCs that presented clear oocytes with homogeneous cytoplasm, surrounded by two or more compact layers of cumulus cells and intact zona pellucida were selected for the experiment. A total of 200 COCs were randomly assigned to the following treatments: IVM medium in the absence (control treatment, n=50) or in the presence of anethole at concentrations of 30 μg/mL (AN30, n=50), 300 μg/mL (AN300, n=50) and 2000 µg/mL (AN2000, n=50). The results showed a significantly higher percentage of oocytes in metaphase II in the AN 300 treatment when compared to the AN2000 treatment, although without differences with the control treatment. The SOD enzyme activity was significantly reduced in the AN2000 treatment when compared to the control treatment. However, CAT enzyme activity as well as thiol content did not differ between treatments. Finally, the total antioxidant capacity assessed by the DPPH and ABTS methods demonstrate that treatments with all anethole concentrations used were significantly higher when compared to the control group. Based on these results, it can be concluded that supplementation with anethole during IVM of oocytes in the ovine species did not present antioxidant potential or act in the meiotic progression. However, due to the fact that the AN 300 treatment increased the MII rate when compared to the AN 2000 treatment, it is proposed to use the AN 300 µg/mL concentration during the in vitro cultivation of reproductive cells.Universidade Estadual do CearáValdevane Rocha AraújoAndrade, Anderson Nascimento De2023-04-05T13:54:04Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttps://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=109559info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UECEinstname:Universidade Estadual do Cearáinstacron:UECE2023-04-05T13:54:04Zoai:uece.br:109559Repositório InstitucionalPUBhttps://siduece.uece.br/siduece/api/oai/requestopendoar:2023-04-05T13:54:04Repositório Institucional da UECE - Universidade Estadual do Cearáfalse |
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