Estabelecimento e multiplicação in vitro de Eriope blanchetii (Benth.) Harley para quantificação da produção de podofilotoxina

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2019
Autor(a) principal: Bispo, Larissa Simões Cerqueira lattes
Orientador(a): Schnadelbach, Alessandra Selbach
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual de Feira de Santana
Programa de Pós-Graduação: Mestrado Acadêmico em Recursos Genéticos Vegetais
Departamento: DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Palavras-chave em Inglês:
Área do conhecimento CNPq:
Link de acesso: http://tede2.uefs.br:8080/handle/tede/939
Resumo: The lignans, are a secondary metabolites class with great biological importance, which are found in some species of the Lamiaceae family. Among the species variety within this family, the outstanding Eriope blanchetii, endemic of Brazil, occurs on the restingas from Bahia and Sergipe. The medicinal value of this species was already proven by a phytochemical and cytotoxic study, on which was detected podophyllotoxin presence, a secondary metabolite that is a precursor of two semisynthetic derivatives (etoposide and teniposide) with an anticancer effect. Considering the vulnerable status given to this species, and being aware that the in natura the biosynthesis of secondary metabolites presents a large variation due to the enviromental conditions, the use of vegetal tissues culture technology is here highlighted. Thus, this work aimed to establish E. blanchetii in vitro cultivation and analyze abiotics factors that might influence over podophyllotoxin expression after the in vitro cultivation. Different desinfestation, germination, conservation and seed dormancy breaking protocols were tested, as well as the salts concentrations influence during the in vitro establishment culture medium. Also, a new seeds desinfestation protocol was proposed for E. blanchetii, that was composed by a pre-germinative stage (at a seed level) and a pos-germinative stage (at a plant level). The most efficient protocol for overcoming seed dormancy procedure was the gibberellin solution at 200mg.L-1 soaking for 1h. The E. blanchetii seeds can be preserved at -80ºC for up to 90 days without compromising its germination potential. The biggest matter production of E. blanchetii can be obtained by the use of a MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) culture medium supplemented with active charcoal 2g.L-1. For in vitro multiplication of E. blanchetii, node regions explants were submitted to different in vitro cultivation conditions, aiming to stimulate a overproduction of podophyllotoxin. The best rooting data were obtained in the absence of regulators. For the aerial parts, fresh matter and dry matter development, the use of 8,88μM of BAP is recommended. The ideal temperature for E. blanchetii in vitro multiplication is 25ºC. Finally, the in vitro cultivation conditions, as well as the abiotic factors used as a stress source, made the podophyllotoxin expression on E. blanchetii impossible.
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The medicinal value of this species was already proven by a phytochemical and cytotoxic study, on which was detected podophyllotoxin presence, a secondary metabolite that is a precursor of two semisynthetic derivatives (etoposide and teniposide) with an anticancer effect. Considering the vulnerable status given to this species, and being aware that the in natura the biosynthesis of secondary metabolites presents a large variation due to the enviromental conditions, the use of vegetal tissues culture technology is here highlighted. Thus, this work aimed to establish E. blanchetii in vitro cultivation and analyze abiotics factors that might influence over podophyllotoxin expression after the in vitro cultivation. Different desinfestation, germination, conservation and seed dormancy breaking protocols were tested, as well as the salts concentrations influence during the in vitro establishment culture medium. Also, a new seeds desinfestation protocol was proposed for E. blanchetii, that was composed by a pre-germinative stage (at a seed level) and a pos-germinative stage (at a plant level). The most efficient protocol for overcoming seed dormancy procedure was the gibberellin solution at 200mg.L-1 soaking for 1h. The E. blanchetii seeds can be preserved at -80ºC for up to 90 days without compromising its germination potential. The biggest matter production of E. blanchetii can be obtained by the use of a MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) culture medium supplemented with active charcoal 2g.L-1. For in vitro multiplication of E. blanchetii, node regions explants were submitted to different in vitro cultivation conditions, aiming to stimulate a overproduction of podophyllotoxin. The best rooting data were obtained in the absence of regulators. For the aerial parts, fresh matter and dry matter development, the use of 8,88μM of BAP is recommended. The ideal temperature for E. blanchetii in vitro multiplication is 25ºC. Finally, the in vitro cultivation conditions, as well as the abiotic factors used as a stress source, made the podophyllotoxin expression on E. blanchetii impossible.As lignanas, classe de metabólitos secundários de grande significado biológico, são encontradas em algumas espécies da família Lamiaceae. Dentre as várias espécies da família, destaca-se Eriope blanchetii, endêmica do Brasil, ocorrendo nas restingas da Bahia e Sergipe. O valor medicinal desta espécie já foi comprovado por estudo fitoquímico e decitotoxicidade, no qual foi detectado a presença de podofilotoxina, metabólito secundário precursor de dois derivados semissintéticos (etoposide e teniposide)que possuem efeito anticâncer. Considerando que a espécie foi categorizada como vulnerável, e levando-se em conta que a biossíntese de metabólitos secundários in natura apresenta larga variação em decorrência das condições ambientais, destaca-se o emprego da tecnologia de cultura de tecidos vegetais. Desta forma, este trabalho teve como objetivo geral estabelecer o cultivo deE. blanchetii in vitro e analisar a influência de fatores abióticos na expressão de podofilotoxina durante o cultivo in vitro. Foram testados diferentes protocolos de desinfestação, germinação, conservação e quebra de dormência de sementes, bem como a influência da concentração de sais no meio de cultura para o estabelecimento in vitro. Um novo protocolo de desinfestação de sementes foi proposto para E. blanchetii, composto por uma etapa pré-germinativa (a nível de semente) e outra pós-germinativa (a nível de planta). O protocolo mais eficiente para a superação da dormência de sementes foi a embebição em solução de giberelina200mg.L-1 por 1h. As sementes de E. blanchetii podem ser conservadas a -80°C por até 90 dias sem comprometer o seu potencial germinativo. A produção de maior quantidade de matériafresca e seca de E. blanchetii pode ser obtida utilizando-se o meio de cultura MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) suplementado com carvão ativado 2g.L-1. Para a multiplicaçãoin vitro de E. blanchetii,explantes da região do nó foram submetidos a diferentes condições de cultivo in vitro, a fim de estimular a superprodução de podofilotoxina. Os melhores dados de enraizamento foram obtidos na ausência de reguladores. Para o desenvolvimento da parte aérea, matéria fresca e seca, recomenda-se o uso de 8,88μM de BAP. A temperatura ideal para a multiplicação in vitro de E. blanchetii é 25 °C. As condições de cultivoin vitro, assim como os fatores abióticos empregados como fonte de estresse, inviabilizaram a expressão da podofilotoxina em E. blanchetii.Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2019-11-29T20:30:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Larissa Bispo - Versão Final.pdf: 1718481 bytes, checksum: 79daa153d6cdbf9bb4e592bdd1af0ce4 (MD5)Made available in DSpace on 2019-11-29T20:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Larissa Bispo - Versão Final.pdf: 1718481 bytes, checksum: 79daa153d6cdbf9bb4e592bdd1af0ce4 (MD5) Previous issue date: 2019-03-25Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEBapplication/pdfporUniversidade Estadual de Feira de SantanaMestrado Acadêmico em Recursos Genéticos VegetaisUEFSBrasilDEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICASCLAE. 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Harley para quantificação da produção de podofilotoxinainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis81466464816222418746006006006006005026123383450589282-2899930502695051987737708247419018223-8233071094704392586info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEFSinstname:Universidade Estadual de Feira de Santana (UEFS)instacron:UEFSORIGINALDissertação Larissa Bispo - Versão Final.pdfDissertação Larissa Bispo - Versão Final.pdfapplication/pdf1718481http://tede2.uefs.br:8080/bitstream/tede/939/2/Disserta%C3%A7%C3%A3o+Larissa+Bispo+-+Vers%C3%A3o+Final.pdf79daa153d6cdbf9bb4e592bdd1af0ce4MD52LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82089http://tede2.uefs.br:8080/bitstream/tede/939/1/license.txt7b5ba3d2445355f386edab96125d42b7MD51tede/9392019-11-29 17:30:56.539oai:tede2.uefs.br:8080:tede/939Tk9UQTogQ09MT1FVRSBBUVVJIEEgU1VBIFBSP1BSSUEgTElDRU4/QQpFc3RhIGxpY2VuP2EgZGUgZXhlbXBsbyA/IGZvcm5lY2lkYSBhcGVuYXMgcGFyYSBmaW5zIGluZm9ybWF0aXZvcy4KCkxJQ0VOP0EgREUgRElTVFJJQlVJPz9PIE4/Ty1FWENMVVNJVkEKCkNvbSBhIGFwcmVzZW50YT8/byBkZXN0YSBsaWNlbj9hLCB2b2M/IChvIGF1dG9yIChlcykgb3UgbyB0aXR1bGFyIGRvcyBkaXJlaXRvcyBkZSBhdXRvcikgY29uY2VkZSA/IFVuaXZlcnNpZGFkZSAKWFhYIChTaWdsYSBkYSBVbml2ZXJzaWRhZGUpIG8gZGlyZWl0byBuP28tZXhjbHVzaXZvIGRlIHJlcHJvZHV6aXIsICB0cmFkdXppciAoY29uZm9ybWUgZGVmaW5pZG8gYWJhaXhvKSwgZS9vdSAKZGlzdHJpYnVpciBhIHN1YSB0ZXNlIG91IGRpc3NlcnRhPz9vIChpbmNsdWluZG8gbyByZXN1bW8pIHBvciB0b2RvIG8gbXVuZG8gbm8gZm9ybWF0byBpbXByZXNzbyBlIGVsZXRyP25pY28gZSAKZW0gcXVhbHF1ZXIgbWVpbywgaW5jbHVpbmRvIG9zIGZvcm1hdG9zID91ZGlvIG91IHY/ZGVvLgoKVm9jPyBjb25jb3JkYSBxdWUgYSBTaWdsYSBkZSBVbml2ZXJzaWRhZGUgcG9kZSwgc2VtIGFsdGVyYXIgbyBjb250ZT9kbywgdHJhbnNwb3IgYSBzdWEgdGVzZSBvdSBkaXNzZXJ0YT8/byAKcGFyYSBxdWFscXVlciBtZWlvIG91IGZvcm1hdG8gcGFyYSBmaW5zIGRlIHByZXNlcnZhPz9vLgoKVm9jPyB0YW1iP20gY29uY29yZGEgcXVlIGEgU2lnbGEgZGUgVW5pdmVyc2lkYWRlIHBvZGUgbWFudGVyIG1haXMgZGUgdW1hIGM/cGlhIGEgc3VhIHRlc2Ugb3UgCmRpc3NlcnRhPz9vIHBhcmEgZmlucyBkZSBzZWd1cmFuP2EsIGJhY2stdXAgZSBwcmVzZXJ2YT8/by4KClZvYz8gZGVjbGFyYSBxdWUgYSBzdWEgdGVzZSBvdSBkaXNzZXJ0YT8/byA/IG9yaWdpbmFsIGUgcXVlIHZvYz8gdGVtIG8gcG9kZXIgZGUgY29uY2VkZXIgb3MgZGlyZWl0b3MgY29udGlkb3MgCm5lc3RhIGxpY2VuP2EuIFZvYz8gdGFtYj9tIGRlY2xhcmEgcXVlIG8gZGVwP3NpdG8gZGEgc3VhIHRlc2Ugb3UgZGlzc2VydGE/P28gbj9vLCBxdWUgc2VqYSBkZSBzZXUgCmNvbmhlY2ltZW50bywgaW5mcmluZ2UgZGlyZWl0b3MgYXV0b3JhaXMgZGUgbmluZ3U/bS4KCkNhc28gYSBzdWEgdGVzZSBvdSBkaXNzZXJ0YT8/byBjb250ZW5oYSBtYXRlcmlhbCBxdWUgdm9jPyBuP28gcG9zc3VpIGEgdGl0dWxhcmlkYWRlIGRvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcywgdm9jPyAKZGVjbGFyYSBxdWUgb2J0ZXZlIGEgcGVybWlzcz9vIGlycmVzdHJpdGEgZG8gZGV0ZW50b3IgZG9zIGRpcmVpdG9zIGF1dG9yYWlzIHBhcmEgY29uY2VkZXIgPyBTaWdsYSBkZSBVbml2ZXJzaWRhZGUgCm9zIGRpcmVpdG9zIGFwcmVzZW50YWRvcyBuZXN0YSBsaWNlbj9hLCBlIHF1ZSBlc3NlIG1hdGVyaWFsIGRlIHByb3ByaWVkYWRlIGRlIHRlcmNlaXJvcyBlc3Q/IGNsYXJhbWVudGUgCmlkZW50aWZpY2FkbyBlIHJlY29uaGVjaWRvIG5vIHRleHRvIG91IG5vIGNvbnRlP2RvIGRhIHRlc2Ugb3UgZGlzc2VydGE/P28gb3JhIGRlcG9zaXRhZGEuCgpDQVNPIEEgVEVTRSBPVSBESVNTRVJUQT8/TyBPUkEgREVQT1NJVEFEQSBURU5IQSBTSURPIFJFU1VMVEFETyBERSBVTSBQQVRST0M/TklPIE9VIApBUE9JTyBERSBVTUEgQUc/TkNJQSBERSBGT01FTlRPIE9VIE9VVFJPIE9SR0FOSVNNTyBRVUUgTj9PIFNFSkEgQSBTSUdMQSBERSAKVU5JVkVSU0lEQURFLCBWT0M/IERFQ0xBUkEgUVVFIFJFU1BFSVRPVSBUT0RPUyBFIFFVQUlTUVVFUiBESVJFSVRPUyBERSBSRVZJUz9PIENPTU8gClRBTUI/TSBBUyBERU1BSVMgT0JSSUdBPz9FUyBFWElHSURBUyBQT1IgQ09OVFJBVE8gT1UgQUNPUkRPLgoKQSBTaWdsYSBkZSBVbml2ZXJzaWRhZGUgc2UgY29tcHJvbWV0ZSBhIGlkZW50aWZpY2FyIGNsYXJhbWVudGUgbyBzZXUgbm9tZSAocykgb3UgbyhzKSBub21lKHMpIGRvKHMpIApkZXRlbnRvcihlcykgZG9zIGRpcmVpdG9zIGF1dG9yYWlzIGRhIHRlc2Ugb3UgZGlzc2VydGE/P28sIGUgbj9vIGZhcj8gcXVhbHF1ZXIgYWx0ZXJhPz9vLCBhbD9tIGRhcXVlbGFzIApjb25jZWRpZGFzIHBvciBlc3RhIGxpY2VuP2EuCg==Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttp://tede2.uefs.br:8080/PUBhttp://tede2.uefs.br:8080/oai/requestbcuefs@uefs.br|| bcref@uefs.br||bcuefs@uefs.bropendoar:2019-11-29T20:30:56Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UEFS - Universidade Estadual de Feira de Santana (UEFS)false
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