Imobilização de B-glicosidase de soja em quitosana

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Grade, Luciana Carvalho
• Orientador(a): Ribeiro, Mara Lúcia Luiz [Orientador]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Enzimas; Aplicações industriais; Quitosana; Isoflavonas; Soja; Enzymes; Soybean industry; Response surfaces (Statistics); Industrial applications
• Link de acesso: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/9061

Resumo: A ß-glicosidase (ß-D-glicosídeo glicohidrolase, EC 32121) é uma enzima que cliva ligações ß-glicosídicas de di e/ou oligossacarídeos liberando aglicona e glicose, estando amplamente distribuída na natureza Estas enzimas hidrolisam as isoflavonas ß-glicosídicas (genistina, daidzina e glicitina) e liberam as isoflavonas agliconas (genisteína, daidzeína e gliciteína) que apresentam ação benéfica na saúde humana O objetivo deste trabalho foi otimizar a imobilização da b-glicosidase de cotilédones de soja em quitosana, caracterizá-la parcialmente e aplicá-la em extrato aquoso de soja A ß-glicosidase foi extraída de farinha de cotilédones com tampão fosfato de sódio 1 mM, pH 6,6, na proporção 1:1 (p/v), com posterior acidificação com HCl ,1N até pH 5, para obtenção do extrato bruto que foi fracionado com (NH4)2SO4 de -4% e 4-85% de saturação a 4°C Os precipitados, ressuspensos em tampão fosfato citrato 5 mM, pH 5, e os sobrenadantes foram dialisados no mesmo tampão A fração com maior atividade de ß-glicosidase foi imobilizada em grânulos de quitosana 1% Para otimizar a imobilização, foram utilizados planejamentos fatoriais completos e metodologia de superfície de resposta Na etapa de otimização de ativação dos grânulos de quitosana com glutaraldeído, foi encontrado como ideal o uso de glutaraldeído 2,5%, 8 h de agitação e uso de tampão TRIS-acetato pH 7,5 Para a etapa de imobilização da ß-glicosidase, as condições ótimas foram 7 h de agitação num total de 2 h de incubação, adição de um teor de proteínas de 23,81 mg e uso de tampão fosfato-citrato pH 6,5 durante a imobilização A ß-glicosidase imobilizada apresentou condições ótimas de reação em pH 5,5 e a 5°C A 7°C, a enzima apresentou baixa estabilidade, com redução de 89% da atividade, após 1 min de incubação O Km e Vmáx da enzima imobilizada com o substrato ?-nitrofenil-ß-D-glicopiranosídeo foi de ,4936 mM e 1,118 µmol ?-nitrofenol/min, respectivamente, por grânulo A enzima imobilizada apresentou boa estabilidade operacional, com uma meia-vida de sete ciclos A atividade de ß-glicosidase imobilizada foi inibida por Li2SO4, LiCl, CoCl2, CuSO4, CuCl2, AgNO3, HgCl2, Ni(NO3)2, glucona-d-lactona e acetato de cobre 1 mM, apresentando atividade residual de 72, 81, 83, 76, 49, 71, 36, 57, 35 e 52%, respectivamente O MnCl2 e MnSO4 aumentaram a atividade da enzima em 93 e 88%, respectivamente A aplicação da ß-glicosidase imobilizada em extrato aquoso de soja mostrou-se eficiente na liberação de glicose e consequentemente na liberação de isoflavonas agliconas