Hesperidina-metil-chalcona interage com o resíduo Ser276 da subunidade p65 do NFkB e inibe a dor e a inflamação em modelo de artrite e a ativação de macrófagos RAW 264.7 induzidos por zymosan

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Oliveira, Fernanda Soares Rasquel de
• Orientador(a): Verri Júnior, Waldiceu Aparecido
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Hiperalgesia; Flavonoide; Antioxidante; Nocicepção; In silico; Artrite; Inflamação; Dor
• Link de acesso: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/17097

O zymosan é um polissacarídeo derivado do fungo Saccharomyces cerevisiae. A administração deste polissacarídeo na cavidade articular é capaz de induzir artrite em camundongos. A hesperidina-metil-chalcona é um flavonoide do grupo das flavanonas com eficácia terapêutica demonstrada por diversos estudos. Apresenta efeitos analgésicos frente à estímulos inflamatórios, oferece proteção contra radiação UVB, inibe o processo inflamatório e estresse oxidativo. Todavia, seus efeitos sobre a ativação de macrófagos RAW 264.7 e a inflamação articular induzidas pelo zymosan ainda são desconhecidos. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos e mecanismos de ação do flavonoide hesperidina-metil-chalcona em modelo de artrite induzida por zymosan. Para isso, inicialmente foi realizada uma curva dose resposta para determinar a dose mais eficaz em reduzir a hiperalgesia mecânica. Em seguida, foram avaliados os efeitos do tratamento com a dose mais eficaz de hesperidina-metil-chalcona sobre o edema articular e recrutamento celular (contagem total e diferencial dos leucócitos, além de análise histopatológica), ensaios colorimétricos de GSH, FRAP, ABTS e NBT como parâmetros de estresse oxidativo. A produção das citocinas IL-33, TNF-α e IL-6 foi determinada por ELISA e expressão de RNAm para gp91phox e HO-1 por RT-qPCR. Ademais, in vitro, foi quantificada a produção de IL-33, TNF-α e IL-6, presença de EROs (ensaio DAF2DA para EROs intracelular) e ativação do NFκB. Os resultados obtidos na curva dose-resposta demonstraram que o pré-tratamento com a dose de 100 mg/kg da hesperidina-metil chalcona apresentou maior eficácia em reduzir a dor inflamatória induzida por zymosan. O tratamento com a dose previamente determinada foi eficaz na redução do edema articular, do recrutamento total e diferencial de leucócitos, reduziu significativamente in vitro e in vivo os níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-33, TNF α e IL-6 e do infiltrado celular nas análises histopatológicas. Observou-se também aumento na capacidade antioxidante pelos ensaios de GSH, FRAP e ABTS além de diminuir a produção de ânion superóxido pelo ensaio NBT, expressão de gp91phox e aumento na expressão de HO-1. Também foi observada uma redução na geração de EROs totais e na ativação do NFκB, in vitro. Além disso, por análise molecular in silico, a interação da hesperidina-metil-chalcona com a Ser276 da subunidade p65, um resíduo de aminoácido de interesse para a ativação do NFκB, sugere um dos mecanismos pelo qual esse flavonoide promove inibição do processo inflamatório. Esta é a primeira demonstração da interação direta da hesperidina-metil-chalcona com o NFκB. Dessa forma, esse estudo demonstrou, pré-clinicamente, o potencial analgésico e anti-inflamatório da hesperidina-metil-chalcona em modelo de artrite induzida por zymosan e in vitro em macrófagos RAW 264.7.