Identificação molecular, caracterização bioquímica e prospecção de metabólitos secundários produzidos por Photorhabdus sp.

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Brito, Cássia de Fátima Pereira de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Norte do Paraná; Brasil; UENP/CLM::CCA; UENP; PPAGRO
• Palavras-chave em Português: Nematoides entomopatogênicos; Bactéria simbionte; Heterorhabditis amazonensis; Heterorhabditis mexicana; Ciências Agrárias; Agronomia; Fitossanidade; Microbiologia Agrícola
• Link de acesso: https://repositorio.uenp.edu.br/handle/123456789/335

Este trabalho teve como objetivo, identificar as bactérias simbiontes de quatro isolados de nematoides entomopatogênicos (NEPs) do gênero Heterorhabditis sp. (isolados UENP-n 04, 05, 06 e UEL 08), nativos do Norte do Paraná, e realizar a caracterização molecular, bioquímica e biológica destas bactérias, além de prospectar a capacidade de produção de metabólitos secundários com efeitos antimicrobianos, fungicidas e inseticidas. As bactérias foram isoladas a partir de hemolinfa de lagartas de Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae) e a identificação molecular foi feita a partir da amplificação de parte do gene rRNA 16S. Também foi feita a caracterização por meio de testes bioquímicos de motilidade, coloração de Gram, atividade de lipase, protease, lecitinase e bioluminescência e avaliada a produção de compostos com atividade antimicrobiana sobre as bactérias Bacillus thuringiensis, Staphylococcus aureus e Escherichia coli. A patogenicidade sobre insetos foi avaliada em lagartas de G. mellonella, Anticarsia gemmatalis (Lepidoptera: Noctuidae) e Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) e o efeito fungicida sobre os fungos Metarhizium anisopliae e Beauveria bassiana. Além disso, prospectou-se a produção de metabólitos secundários a partir de extratos, que foram avaliados quanto ao efeito inseticida sobre G. mellonella (aplicação oral e via hemolinfa), efeito antimicrobiano em bactérias S. aureus, E. coli, e B. thunringiensis e fungicida nos fungos M. anisopliae e B. bassiana. Três cepas bacterianas obtidas foram identificadas como pertencendo a espécie Photorhabdus luminescens (P05, P06 e L08) e a outra como Photorhabdus asymbiotica (P04). Quanto aos testes bioquímicos observou-se que todas as cepas foram positivas para motilidade, atividade lipase, protease e para absorção do azul de bromotimol, mas negativas para a atividade lecitinase. Quando inoculadas na hemolinfa de lagartas de G. mellonella, S. frugiperda e A. gemmatalis na forma de suspensão, as cepas foram altamente virulentas causando mortalidade acima de 85% nas três espécies de lagartas. Quando avaliadas em diferentes concentrações, P04 mostrou-se mais agressiva, matando acima de 95% das lagartas infectadas em todas as concentrações avaliadas após 18 horas de inoculação. Com relação ao efeito antimicrobiano, observou-se que as quatro cepas bacterianas apresentaram atividade positiva inibindo o crescimento de B. thuringiensis e S. aureus mas apenas P04 apresentou efeito antimicrobiano contra E. coli. O efeito dos extratos aquosos obtidos a partir das culturas de bactérias P04 apresentou resultados positivos para ação fungicida sobre B. bassiana e M. anisopliae e o extrato proveniente da cepa L08 apresentou efeito antimicrobiano sobre a bactéria S. aureus, porém não apresentaram efeito inseticida sobre G. mellonella quando inoculadas na hemolinfa ou quando ingeridas.