Proteína anticongelante tipo I e resveratrol na criopreservação de sêmen ovino
| Ano de defesa: | 2024 |
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Resumo: | Nesta tese foi avaliado o efeito da associação de resveratrol (RV) e proteína anticongelante do tipo I (AFP I) no diluente de sêmen ovino (Exp. 1) e a adição de RV após descongelamento de espermatozoides ovinos criopreservados na presença ou não de AFP I sobre os parâmetros de qualidade espermática durante o período de incubação de 3 h (Exp. 2). Após coleta de sêmen (Exp. 1: quatro; Exp. 2: oito carneiros), o sêmen foi processado (Exp. 1 em pool; Exp. 2: individualmente) e dividido em grupos. No Exp. 1, CONT) apenas com diluente Tris-gema glicerol; AFP) diluidor + AFP I (0,1 µg/mL); R10 e R50) diluidor + RV nas concentrações de 10 µM/mL ou 50 µM/mL; e por fim AR10 e AR50) diluidor + AFP I + RV nas duas concentrações. No Exp. 2, metade do volume de cada ejaculado foi diluído com Tris gema glicerol (TG) ou adicionado 0,1 µg/mL de AFP I. Após a diluição, os ejaculados foram criopreservados e, posteriormente, descongelados para análises às 0 h (Exp. 1) ou incubados por 3 h (Exp. 2). Durante a incubação com TALP-Hepes suplementado ou não com 50 µM/mL de RV, quatro grupos foram formados: TGC, meio diluidor como controle; TGR, diluidor + incubação com resveratrol; AC, diluidor adicionado de AFP I (0,1 µg/mL); AR, diluidor adicionado de AFP I + RV. As seguintes análises foram realizadas nos dois experimentos: cinética espermática, integridade da membrana plasmática, atividade mitocondrial, status da capacitação, ligação espermática e lipoperoxidação. Ressalta-se que no Exp. 2 as duas últimas análises foram avaliadas apenas ao final da incubação (3 h). O hipo-osmótico e a avaliação da morfologia foram realizadas apenas no Exp. 1. No Exp. 1 não houve diferença na cinética espermática, integridade da membrana plasmática, hipo-osmótico e atividade mitocondrial. Houve maior probabilidade de aumento da lipoperoxidação (P = 0,085) e espermatozoides com alta atividade mitocondrial (P = 0,07), além da redução da funcionalidade da membrana (P = 0,06) usando apenas AFP. Foi detectada uma interação entre a AFP e RV (50 µM), aumentando a reação do acrossoma (P = 0,034), redução dos não capacitados (P = 0,009) e ligação espermática (P = 0,04). Já o RV sozinho (50 µM) apresentou maior probabilidade (P = 0,058) de ligação espermática. No Exp. 2 houve redução de todos os parâmetros (P < 0,0001) durante o período de incubação (1,5 h e 3 h) quando comparados ao 0 h; e não foram encontradas diferenças entre os grupos. Conclui-se que a associação do RV e AFP I não melhorou a qualidade do sêmen descongelado e ainda promoveu alguns efeitos deletérios, apesar do RV sozinho melhorar a capacidade de fertilização. A incubação com RV por 3 h após o descongelamento de sêmen ovino adicionado ou não de AFP I ao meio diluidor, não foi capaz de melhorar os parâmetros espermáticos in vitro e reduzir os níveis de lipoperoxidação no meio pós-descongelamento do sêmen ovino |
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In Exp. 1, CONT) only with Tris-egg yolk (TEY) glycerol extender; AFP) extender + AFP I (0.1 µg/mL); R10 and R50) extender + RV at concentrations of 10 µM/mL or 50 µM/mL; and finally, AR10 and AR50) extender + AFP I + RV in both concentrations. In Exp. 2, half of each ejaculate was diluted with TEY extender or added 0.1 µg/mL of AFP I. After dilution, they were cryopreserved and thawed and immediately analyzed at 0 h (Exp. 1) or incubated for 3 h (Exp. 2). For incubation with TALP-Hepes supplemented or not with 50 µM/mL RV, four groups were formed: TEY, extender pure as control incubation; TEY + RV, extender + RV incubation; AFP, extender added of 0.1 µg/mL AFP I incubation; AFP + RV, extender added of 0.1 µg/mL AFP I + RV incubation. The following analyses were performed in both experiments: sperm kinetics, plasma membrane integrity, mitochondrial activity, capacitation status, sperm binding, and lipoperoxidation. Of note, in Exp. 2, the last two analyses were evaluated only at the end of incubation (3 h). The hypo-osmotic, and morphology assessment were performed only in Exp. 1. In Exp. 1, there was no difference in sperm kinetics, plasma membrane integrity, hypo-osmotic, and mitochondrial activity. A higher probability to enhance lipoperoxidation (P = 0.085) and sperm with high mitochondrial activity (P = 0.07), and reduction of cells with functional membrane (P = 0.06) were detected when using AFP alone. Interaction of AFP and RV (50 µM) was found, increasing the acrosome reaction (P = 0.034) and reducing the non-capacitated cells (P = 0.009), and sperm binding (P = 0.04). The RV alone (50 µM) showed a high probability (P = 0.058) of sperm binding. In Exp. 2, there was only a reduction in all parameters (P < 0.0001) during the incubation period (1.5 h and 3 h). In conclusion, the association of RV and AFP I did not improve the quality of frozen-thawed semen and even promoted deleterious effects compared to its single addition in the semen extender, although RV alone improved fertilization capacity (Exp. 1). The exposure of RV during incubation (3 h) after thawing with or without AFP I added to extender media, was not able to improve sperm in vitro parameters or reduce the levels of lipoperoxidation in the postthawing of ram semen.131 f.Universidade Federal FluminenseCC-BY-SAinfo:eu-repo/semantics/openAccessProteína anticongelante tipo I e resveratrol na criopreservação de sêmen ovinoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisAntioxidanteCarneiroCongelação lentaAFPAntioxidanteOvinoCriopreservaçãoSêmenMelhoramento genéticoAntioxidantRamSlow freezingAFPDoutoradoUniversidade Federal FluminenseFaculdade de VeterináriaPrograma de Pós-Graduação em Medicina Veterinária - Clínica e Reprodução Animal2024Niterói, RJporreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF)instname:Universidade Federal Fluminense (UFF)instacron:UFFORIGINALTese_Viviane Lopes Brair.pdfTese_Viviane Lopes Brair.pdfapplication/pdf1759234https://app.uff.br/riuff/bitstream/1/35083/1/Tese_Viviane%20Lopes%20Brair.pdf51b7da998638c5e1a79927cb80dd4967MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81866https://app.uff.br/riuff/bitstream/1/35083/2/license.txt43cd690d6a359e86c1fe3d5b7cba0c9bMD521/350832024-10-21 14:21:09.555oai:app.uff.br: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ório InstitucionalPUBhttps://app.uff.br/oai/requestriuff@id.uff.bropendoar:21202024-10-21T17:21:09Repositório Institucional da Universidade Federal Fluminense (RIUFF) - Universidade Federal Fluminense (UFF)false |
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