Análise multi-ômica comparativa do secretoma de isolados ambiental (NEFF) e clínico (T4) de Acanthamoeba castellanii através da técnica de MPLEX

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Medeiros, Elisa Gonçalves
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/87559/001300000f45g
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Análises multi-ômicas; Patogênese ameba; Vesícula extracelular; Acanthamoeba castellanii; Genótipo; Vesículas extracelulares; Multi-omics analyses; Amoeba pathogenesis; Extracellular vesicle
• Link de acesso: http://app.uff.br/riuff/handle/1/27109; http://dx.doi.org/10.22409/PPGMPA.2022.m.15762913759

Acanthamoeba castellanii é um patógeno humano e devido ao seu caráter ubíquo, pode desemprenhar importante papel de hospedeiro ambiental de diversos patógenos no solo. Alguns genótipos importantes foram descritos na literatura, dentre estes o T4, englobando isolados ambientais e clínicos, sendo que estes últimos demonstram maior virulência e frequentemente pior prognóstico Diferenças foram observadas entre isolados clínicos (T4) e isolados ambientais (Neff) durante infecção, sugerindo que distintas moléculas estão envolvidas na patogenia. Estas podem ser liberadas por meio de vesículas extracelulares (EVs), veículos de fatores de virulência em diversos patógenos, destacando a importância da caracterização destes componentes através de um estudo multi-ômico nestas estruturas. Assim, para analisar as EVs obtidas dos isolados clínicos (T4) e ambiental (NEff) de A. castellanii por multi-ômica utilizamos a técnica MPLEX (Metabolite, Protein and Lipid Extraction) acoplada à espectrometria de massas, para comparar a sua composição protéica, lipídica e as vias metabólicas expressas com possíveis implicações na patogênese. Após o cultivo dos organismos, foram coletados os sobrenadantes das cepas, e após a eliminação das células e uma sequência de etapas de concentração/filtração e ultracentrifugações, as EVs foram coletadas. Posteriormente, foram realizadas a extração de metabólito, proteína e lipídeo (MPLEx) e as distintas frações analisadas por cromatografia líquida de ultra eficiência acopladas à espectrometria de massas para as análises multi-ômicas. As identificações foram feitas comparando-se distintas bases de dados (www.uniprot.org e www.kegg.org). Foram observadas diferenças significantes na expressão de proteínas, metabólitos e lipídios entre os isolados T4 e Neff nas análises multi-ômicas. Entre os lipídios foram observadas populações com mais insaturações em Neff enquanto T4 predominou populações monoinsaturadas. Já para proteínas e metabólitos, foram observadas diferenças de expressão nas triplicatas, demonstrando que as vias metabólicas estão sendo reguladas diferentemente entre para ambos os grupos. Desta forma, observou-se diferenças na expressão de moléculas entre os isolados, o que sugere que as vias metabólicas estão sendo reguladas de forma distinta, o que poderia mudar o comportamento dessas cepas durante um processo infeccioso