Caracterização estrutural e funcional de um inibidor de PLA2 presente no plasma da cascavel sulamericana (Crotalus durissus terrificus)

• Ano de defesa: 2005
• Autor(a) principal: Roberta Marcia Marques dos Santos
• Orientador(a): Marcelo Matos Santoro
• Banca de defesa: Marcelo Porto Bemquerer, Suely Gomes de Figueiredo, Paulo Sergio Lacerda Beirao, Jonas Enrique Aguilar Perales
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Bioquímica
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-8A5FT5

A crotoxina (Ctx) é o principal componente tóxico da peçonha da cascavel sulamericana Crotalus durissus terrificus. É um heterodímero composto por duas subunidades: CB, uma PLA2 tóxica, e CA, que não apresenta atividade enzimática nem neurotóxica. No plasma da cascavel está presente uma proteína, denominada CNF, para fator neutralizante de C. d. terrificus capaz de inibir a atividade enzimática e letal do veneno homólogo. A ação inibidora de CNF se deve a substituição de CA no complexo Ctx (CACB) formando um novo complexo estável CB/CNF. No presente estudo, uam nova metodologia para purificação de CNF foi desenvolvida. CNF está presente no plasma da serpente como uma mistura das formas glicosilada e deglicosilada. Foi demonstrado que a glicosilação não é necessária para sua atividade inibidora de PLA2. A interferência de CNF na ligação do complexo Ctx marcado radioativamente, formado por CA e uma isoforma de CB, CA-125ICB2, àsinaptossomas cérebro corticais de rato foi avaliada em diferentes condições. A competição por Ctx e CA não marcados foi feita em paralelo. CNF foi capaz de inibir a ligação da toxina aos sinptossomas em todas as condições testadas, incluindo o deslocamento de Ctx após a sua ligação à membrana sinaptossomal. O modelo de interação entre Ctx, o receptor e CNF, previamente proposto, foi aprimorado. Ossegmentos de peptídeos lineares, provavelmente envolvidos na interação entre as proteínas nos complexos de CA ou CNF com duas isoformas de CB (CB1 e CB2) foram determinados pela técnica se síntese multipla de peptídeos lineares. Esses segmentos foram identificados em um modelo tridimensional, proposto para asisoformas de CB, como possíveis sítios de interação linear.