Fatores que influenciam a edição gênica com CRISPR/Cas9 : prevalência de anticorpos anti-SpCas9 e panorama de uso na América do Sul

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Frâncio, Lariane
• Orientador(a): Matte, Ursula da Silveira
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Edição de genes; Doenças genéticas
• Palavras-chave em Inglês: Gene editing; Genetic diseases
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/276203

A edição gênica pelo sistema CRISPR/Cas9 é a ferramenta mais promissora para correção de doenças genéticas devido à sua simplicidade e precisão, principalmente quando comparada a outros métodos. Muitos recursos permitiram a rápida introdução desse sistema em laboratórios de pesquisa. Porém, como novas tecnologias são introduzidas em ritmos e propósitos diferentes em diversos países. No primeiro trabalho, realizamos uma revisão da literatura sobre o progresso da pesquisa usando o sistema CRISPR/Cas na América do Sul, com foco em aplicações relacionadas à saúde. O banco de dados PubMed foi utilizado para identificar artigos relevantes sobre edição de genes com CRISPR/Cas, enquanto as patentes foram pesquisadas no banco de dados Patentscope. Além disso, ClinicalTrials.gov foi usado para encontrar informações sobre ensaios clínicos ativos e de recrutamento. Foram encontrados 668 artigos não duplicados (extraídos do PubMed) e 225 patentes (nem todas relacionadas à saúde). Cento e noventa e dois artigos sobre aplicações do CRISPR/Cas na área da saúde foram analisados detalhadamente. Em 95 destes, mais de 50% dos autores eram filiados a instituições sul-americanas. Os estudos experimentais CRISPR/Cas visam diferentes doenças, especialmente câncer, distúrbios neurológicos e endócrinos. A maioria das patentes refere-se a pedidos genéricos, mas aquelas com indicações claras de doenças são para erros inatos do metabolismo, distúrbios oftalmológicos, hematológicos e imunológicos. Não foram encontrados ensaios clínicos envolvendo países sul-americanos. Embora as pesquisas sobre edição de genes na América do Sul estejam avançando, nossos dados mostram o baixo número de inovações nacionais protegidas por propriedade intelectual nesse campo. No entanto, como em todas tecnologias, existem desafios a serem superados. A Cas9 mais utilizada é derivada de Staphylococcus aureus e Streptococcus pyogenes, duas espécies bacterianas que infectam a população humana, podendo ocorrer com maior frequência em pacientes propensos a doenças respiratórias, como os portadores de Mucopolissacaridoses (MPS). Essa imunidade existente pode diminuir a eficiência do tratamento ou levar a abordagens ex-vivo. O segundo trabalho busca entender a prevalência de anticorpos anti-SpCas9 em pacientes brasileiros com MPS tipo I e tipo II, para os quais estratégias de edição de genes estão sendo testadas em modelos animais. Foram coletadas amostras de plasma de doadores saudáveis (n = 90), pacientes com diagnóstico bioquímico de MPS I (n = 27) e MPS II (n = 37). Uma amostra de um paciente com infecção confirmada por S. pyogenes (n = 1) foi usada como controle positivo. O título de anticorpos foi determinado por ELISA e as amostras foram consideradas positivas se acima de três vezes o ponto de corte (valor obtido para a amostra positiva). A idade mediana dos doadores saudáveis foi de 38 anos (interquartil 27,5–46,25). Para MPS I foi de 3 anos (intervalo interquartil 1–6) e para MPS II 4 anos (intervalo interquartil 2–9,5). A prevalência de amostras positivas foi de 3,33% no grupo controle, 7,4% (MPS I) e 10,8% (MPS II) (p<0,05 entre grupo controle e MPS I e II). Nossos resultados mostraram uma prevalência significativamente maior de anticorpos contra SpCas9 em pacientes com MPS I e II em comparação com o grupo controle, sugerindo implicações importantes para futuros ensaios clínicos.