Estudo experimental de moléculas com potencial antifúngico contra agentes causadores da cromoblastomicose

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Ransan, Leonardo Girardi
• Orientador(a): Scroferneker, Maria Lucia
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Cromoblastomicose; Fonsecaea; Antifúngicos; Genotoxicidade; Drosophila melanogaster
• Palavras-chave em Inglês: Chromoblastomycosis; Fonsecaea pedrosoi; Antifungal activity; Imidazolium salts; Cytotoxicity; Genotoxicity; Drosophila melanogaster; FTIR
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/276585

Introdução: A cromoblastomicose (CBM) é uma infecção fúngica subcutânea causada por espécies de fungos melanizados, geralmente pertencentes ao gênero Fonsecaea. Atualmente o tratamento padrão envolve o uso de antifúngicos como o itraconazol (ITZ), mas o tempo de tratamento é longo e as taxas de cura são baixas, devido à natureza recalcitrante desta doença. Sais imidazólicos (SI) são um grupo de compostos químicos de crescente relevância, por apresentarem atividades biológicas diversas. Entretanto, mais estudos são necessários para avaliar seu potencial como fármacos, em termos de atividade antimicrobiana, bem como o risco de apresentarem citotoxicidade e genotoxicidade a células animais. Além disso, a Espectroscopia no Infravermelho com Transformada de Fourier (FTIR) se apresenta como uma promissora técnica para analisar a interação entre antimicrobianos e microrganismos. Objetivos: Avaliar a atividade antifúngica dos sais imidazólicos (C₁₀)2MImCl, C₁₆MImCl, C₁₆PyrCl*H₂O, C₁₆M₂ImCl e C₁₆BnMImCl em amostras clínicas de espécies fúngicas causadoras da CBM. Avaliar a citotoxicidade e genotoxicidade destes sais em fibroblastos humanos e de Hamster chinês. Observar se os sais apresentam toxicidade a um modelo de mosca-das-frutas (Drosophila melanogaster). Além disso, utilizar FTIR para analisar os espectros de interação entre células de Fonsecaea pedrosoi e antifúngicos. Métodos: Os testes de atividade antifúngica foram executados de acordo com o protocolo M38-A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) utilizando 78 amostras clínicas de agentes da CBM. Os testes de citotoxicidade foram realizados utilizando os métodos de vermelho neutro (VN) e metil tiazol tetrazólio (MTT), utilizando fibroblastos de pulmão de hamster chines (V79) e fibroblastos de pulmão humano (MRC-5), respectivamente. Os testes de genotoxicidade foram feitos usando as células MRC-5 por meio do ensaio cometa alcalino. O teste de toxicidade a animais foi feito utilizando o modelo de mosca-das-frutas. A identificação das alterações metabólicas causadas por antifúngicos comercializados e pelo sal C₁₆PyrCl*H₂O foi realizada utilizando análise de FTIR da biomassa de F. pedrosoi e algoritmos de reconhecimento de padrões análise de componentes principais (PCA) e análise por agrupamento hierárquico (HCA). Resultados: Os cinco SI tiveram atividade antifúngica contra F. pedrosoi, apresentando CIMs e CFMs menores do que as do itraconazol. Todos os SI apresentaram citotoxicidade nos ensaios de vermelho neutro e metil tiazol tetrazólio nas linhagens celulares V79 e MRC-5, respectivamente. Todos os SI apresentaram genotoxicidade à linhagem celular MRC-5 no ensaio cometa. Os sais não apresentaram toxicidade ao modelo de mosca-das-frutas. A FTIR 7 permitiu analisar e caracterizar os espectros da biomassa de F. pedrosoi tratada com antifúngicos e a maior similaridade metabólica foi observada entre o sal C₁₆PyrCl*H₂O (0,125 µg/mL), e os antifúngicos flucitosina (0,5 µg/mL) e caspofungina (0,06 µg/mL). Conclusões: Este estudo apresenta os SI como novos antifúngicos promissores contra agentes da CBM, e seu uso pode trazer impactos positivos no manejo clínico de infecções causadas por fungos melanizados. A observação de citotoxicidade e genotoxicidade destes novos sais imidazólicos em células animais evidencia a necessidade de mais estudos para determinar suas potenciais aplicações médicas e biotecnológicas. Adicionalmente, foi proposto um modelo utilizando FTIR que permitiu caracterizar os espectros de alteração metabólica de células de F. pedrosoi expostas a antifúngicos.