Caracterização do sistema calicreína-cinina durante o processo ovulatório de bovinos

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2011
Autor(a) principal: Ilha, Gustavo Freitas
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
dARK ID: ark:/26339/001300000kgwt
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Santa Maria
BR
Medicina Veterinária
UFSM
Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: http://repositorio.ufsm.br/handle/1/10101
Resumo: The kallikrein-kinin system (KKS) has been described as an important mediator of physiologic processes. Kallikreins use kininogen (KNG) as substrate to generate bradykinin, the principal active peptide of the KKS which acts through two types of receptors, the B1R and B2R. The objective of this study was to characterize some components of KKS in different compartments of ovary during the ovulation process in bovine. mRNA expression pattern of KNG, B1R and B2R was assessed in theca and granulosa cells and bradykinin concentration and kallikrein-like activity in follicular fluid of bovine peri-ovulatory follicles. In order to obtain a peri-ovulatory follicle (≥ 12mm), twenty-seven cows were submitted to estrus synchronization protocol and ovariectomized by colpotomy at 0, 3, 6, 12 or 24 hours after a GnRH-analog injection (gonadorelin; 100 μg, IM). Follicular fluid was aspirated for enzymatic assays and granulosa and theca cells were harvested for mRNA analysis. The mRNA expressions in follicular cells were evaluated by real-time RT-PCR and data represented as relative to housekeeping gene cyclophilin. Bradykinin concentration and Kallikrein-like activity was measured in follicular fluid by enzymatic immunoassay and selective substrate cleavage, respectively, and the absorbance measured using a plate reader. KNG mRNA expression was similar for both follicular cell types (P>0.05), while B2R expression in theca cells and B1R expression in theca and granulosa cells showed different profiles during peri-ovulatory period (P<0.05). Bradykinin concentration and kallikrein-like activity in follicular fluid were different (P<0.05) according the time during ovulation process. The results provide an important characterization of the presence and possible regulation of KKS during ovulation in bovine.
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In order to obtain a peri-ovulatory follicle (≥ 12mm), twenty-seven cows were submitted to estrus synchronization protocol and ovariectomized by colpotomy at 0, 3, 6, 12 or 24 hours after a GnRH-analog injection (gonadorelin; 100 μg, IM). Follicular fluid was aspirated for enzymatic assays and granulosa and theca cells were harvested for mRNA analysis. The mRNA expressions in follicular cells were evaluated by real-time RT-PCR and data represented as relative to housekeeping gene cyclophilin. Bradykinin concentration and Kallikrein-like activity was measured in follicular fluid by enzymatic immunoassay and selective substrate cleavage, respectively, and the absorbance measured using a plate reader. KNG mRNA expression was similar for both follicular cell types (P>0.05), while B2R expression in theca cells and B1R expression in theca and granulosa cells showed different profiles during peri-ovulatory period (P<0.05). Bradykinin concentration and kallikrein-like activity in follicular fluid were different (P<0.05) according the time during ovulation process. The results provide an important characterization of the presence and possible regulation of KKS during ovulation in bovine.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoO sistema calicreína-cinina (KKS) tem sido descrito como um importante mediador de processos fisiológicos. Calicreínas utilizam o cininogênio (KNG) como substrato para formar a bradicinina, que é o principal peptídeo ativo do KKS o qual atua através de dois tipos de receptores, o B1R e B2R. O objetivo deste estudo foi caracterizar os principais componentes do KKS em diferentes compartimentos ovarianos durante o processo ovulatório de bovinos. A expressão de RNAm de KNG, B1R e B2R foi mensurada em células da teca e granulosa, e concentração de bradicinina e atividade de calicreína no fluido folicular de folículos peri-ovulatórios bovinos. Para obter um folículo peri-ovulatório (≥ 12mm), vinte e sete vacas foram submetidas a um protocolo de sincronização de cios e ovariectomizadas por colpotomia 0, 3, 6, 12 ou 24 horas após uma injeção de um análogo ao GnRH (gonadorelina; 100 μg, IM). O fluido folicular foi aspirado para os ensaios enzimáticos e as células da teca e granulosa dissecadas para análise do RNAm. A expressão do RNAm em células foliculares foi avaliada por PCR em tempo real e os dados representados em relação ao gene constitutivo ciclofilina. A concentração de bradicinina e atividade de calicreína foram mensuradas no fluido follicular por imunoensaio enzimático e clivagem de substrato seletivo, respectivamente, e sua absorbância mensurada por leitor de placas. A expressão de RNAm para o KNG não variou em ambos os tipos celulares nos diferentes tempos (P>0,05), enquanto que para B2R a expressão em células da teca e expressão para B1R nas células da teca e granulosa apresentaram diferentes padrões durante o período peri-ovulatório (P<0,05). A concentração de bradicinina e a atividade de calicreína no fluido follicular foram diferentes (P<0,05) de acordo com o tempo durante o processo ovulatório. Estes resultados demonstram que o KKS está presente e há indicativos de sua regulação durante a ovulação em bovinosUniversidade Federal de Santa MariaBRMedicina VeterináriaUFSMPrograma de Pós-Graduação em Medicina VeterináriaOliveira, João Francisco Coelho dehttp://lattes.cnpq.br/1168979725730267Mezzalira, Alceuhttp://lattes.cnpq.br/2481625293830872Ferreira, Julianohttp://lattes.cnpq.br/2694197910478313Ilha, Gustavo Freitas2017-06-072017-06-072011-02-25info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdfILHA, Gustavo Freitas. Characterization of kallikrein-kinin system during the ovulation process in bovine. 2011. 40 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) - Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria, 2011.http://repositorio.ufsm.br/handle/1/10101ark:/26339/001300000kgwtporinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Manancial - Repositório Digital da UFSMinstname:Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)instacron:UFSM2023-05-30T13:42:29Zoai:repositorio.ufsm.br:1/10101Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttps://repositorio.ufsm.br/PUBhttps://repositorio.ufsm.br/oai/requestatendimento.sib@ufsm.br||tedebc@gmail.com||manancial@ufsm.bropendoar:2023-05-30T13:42:29Manancial - Repositório Digital da UFSM - Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)false
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