Impacto da deleção de GPP2 sobre o processo de autofagia em Cryptococcus neoformans

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Padilla, Adrian Alvarez Padilla [UNIFESP]
• Orientador(a): Vallim, Marcelo Afonso [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Autofagia; Aminoácidos; Estresse; Genes; GPP2; GPR4; Metionina; Levedura
• Palavras-chave em Inglês: Amino acids; Autophagy; Genes; Methionine; Stress; Yeast
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/62115

A criptococose é uma micose de caráter sistêmico de grande importância clínica. A doença é causada, sobretudo, pelas espécies dos complexos Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, esses fungos patogênicos, onipresentes e oportunistas causam infecção pulmonar, cutânea, renal, esplenomegalia e, mais importante dada a letariedade, a meningoencefalite. A criptococcose acomete, principalmente, pacientes com sistema imunológico debilitado. Durante a infecção, a levedura precisa se adaptar às condições desfavoráveis no hospedeiro como a alta temperatura (37° C) e a disponibilidade de nutrientes. O tratamento dessa micose compreende o uso prolongado de antifúngicos que, em sua maioria, são tóxicos para o paciente e o uso constante desses medicamentos induz o surgimento de cepas resistentes. Dessa forma, novas terapias antifúngicas são necessárias para aumentar as opções de tratamento. A autofagia atua como um sistema de degradação e reciclagem intracelular de macromoléculas e organelas que garante a homeostasia e a sobrevivência da célula diante de diferentes fatores de estresse. Análises de transcriptoma RNAseq em meio rico (YPD) em C. neoformans mostram que a deleção do gene GPP2 reprime e induz alguns genes chaves da autofagia tais como: ATG1, ATG2, ATG4, VPS15, ATG15, VPS30 e PEP4. Os nossos dados de qPCR validaram os resultados das análises de RNAseq. Trabalhos anteriores do nosso grupo mostraram que no mutante gpp2Δ ocorre a interrupção de várias vias biossintéticas e captação de aminoácidos que resulta na queda da viabilidade celular, incapacidade de lidar com vários tipos de estresses, redução da expressão de fatores de virulência, (melanina, fosfolipase e urease) e atenuação de virulência em Galleria mellonella, indicando que a biossíntese e absorção de aminoácidos sulfurosos é uma característica importante para a sobrevivência do patógeno in vivo e in vitro. Em Saccharomyces cerevisiae, o Gpp2 é induzido em resposta ao estresse hiperosmótico e oxidativo. Neste trabalho mostramos que em C. neoformans, Gpp2 é necessário para responder, principalmente, ao estresse osmótico, e que a via da autofagia encontra-se reprimida na presença do aminoácido metionina tanto na linhagem selvagem como no mutante gpp2Δ. Nossos dados em conjunto com os trabalhos anteriores, reportados pelo nosso grupo de pesquisa, sugerem que Gpp2 é um fator importante para a adaptação geral do patógeno a vários estresses e talvez possa ser um alvo interessante para uso terapêutico.